УДК: 61:578.7;616-07:061.62
Год издания: 2000

РАЗРАБОТКА И АПРОБАЦИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ТОКСИГЕННЫХ ШТАММОВ C. DIFFICILE С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ

Счесленок Е.П.Лебедкова Н.В.Григорович И.И.Маринич Н.И.Титов Л.П.
Рубрики: 76.03.43
Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: «Разработать на основе синтеза специфических олигонуклеотидов современные тест-системы для диагностики актуальных в Республике Беларусь вирусных и бактериальных инфекций методами молекулярной биологии».
Сроки выполнения НИР: 1998-1999 гг.
Научный руководитель: чл.-кор. НАНБ, д-р мед. наук, проф. Л.П. Титов.

Анаэробные грамположительные бактерии Clostridium difficile обуславливают возникновение антибиотик-ассоциированных диарей и колитов и псевдомембранозного колита как наиболее тяжелой клинической формы данных инфекций. Патологические изменения в слизистой оболочке кишечника больного связывают с токсическим комплексом, состоящим у большинства изолятов из цитотоксина (токсин В) и энтеротоксина (токсин А). В связи с этим, обнаружение токсинов либо tox-генов, кодирующих эти токсины, является ведущим критерием лабораторной диагностики инфекций, обусловленных C. difficile. В настоящее время полимеразная цепная реакция (ПЦР), основанная на амплификации специфических последовательностей генов токсинов А и В, широко используется в лабораторной диагностике C. difficile.

Для проведения ПЦР необходимо использование олигонуклеотидов (праймеров), специфичных нуклеотидной последовательности генов анализируемых инфекционных агентов. На ДНК-синтезаторе ABI-380B были синтезированы праймеры, специфичные участкам tox-генов А и В C. difficile. Показана специфичность синтезированных праймеров в ПЦР. На матрице ДНК референс-штамма C. difficile VPI 10463 с использованием данных праймеров в ПЦР были синтезированы заданные участки генов токсинов А и В, размер синтезированных фрагментов ДНК соответствовал 630 п.о. для гена токсина А и 399 п.о. для гена токсина В. Подобраны оптимальные условия проведения ПЦР с данными праймерами. Получена экспериментальная серия диагностической тест-системы из 10 наборов (каждый набор рассчитан на 50 исследований). Лабораторные испытания данной тест-системы показали ее высокую специфичность при идентификации токсигенных изолятов C. difficile. С использованием ПЦР было проанализировано 15 изолятов C. difficile, выделенных из объектов госпитальной среды и от больных с дисфункциями желудочно-кишечного тракта на фоне антибиотикотерапии. Все изоляты были охарактеризованы как токсигенные, так как в ПЦР на матрице ДНК данных изолятов были синтезированы участки ДНК генов токсинов А и В. Синтез специфических фрагментов ДНК свидетельствует о наличии у анализируемых изолятов C. difficile tox-гена A и tox-гена В, что является показателем токсигенности анаэробных бактерий C. difficile.


Область применения: лабораторная диагностика бактериальных инфекций.
Рекомендации по использованию: тест-система может быть использована для идентификации токсигенных штаммов C. difficile.
Предложения по сотрудничеству: экспериментальное производство диагностической тест-системы для проверки ее эффективности в практике здравоохранения совместно с Республиканским и областными ЦГЭ.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2019 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта