УДК: 616-07:061.62
Год издания: 2000

РАЗРАБОТКА И АПРОБАЦИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКОГО НАБОРА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИГЕНА И АНТИТЕЛ К LEPTOSPIRA INTERROGANS В РЕАКЦИИ МИКРОАГГЛЮТИНАЦИИ НА СТЕКЛЕ

Капитулец С.П.Якуба А.И.Капитулец Н.Н.Тарасова Т.А.Петкевич А.С.
Рубрики: 76.03.4376.35.33
Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: «Разработать диагностические препараты для выявления больных лептоспирозом».
Сроки выполнения НИР: январь 1998 г. - декабрь 2000 г.
Научный руководитель: канд. мед. наук А.С. Петкевич.

Одной из важных задач в борьбе с лептоспирозом - острой природно-очаговой инфекцией человека и животных - является совершенствование микробиологической лабораторной диагностики, основу которой составляют серологические методы. В настоящее время в практике здравоохранения широко используется реакция микроагглютинации на стекле (РМА), являющаяся достаточно простым, доступным практике, и в то же время высокочувствительным и специфичным методом диагностики лептоспироза. Наши исследования были направлены на разработку отечественного лептоспирозного диагностического набора для РМА, что является импортозамещающей и валютосберегающей разработкой.

Основой разработанного набора являются диагностические штаммы патогенных лептоспир серогрупп Interohaemorrhagiae (шт. M-20), Canicola (шт. Каширский), Pomona (шт. Pomona), Grippotiphosa (шт. Москва-5), Тarassovi (шт. Перепелицын), Hebdomadis (шт. Hebdomadis), обладающие широким диапазоном внутригрупповых антигенных связей. Нами отработана технология получения инактивированных антигенных препаратов, сохраняющих высокоактивные агглютинирующие свойства. Таким требованиям отвечал антиген, приготовленный путем двухэтапного центрифугирования лептоспиросодержащей культуры с последующей обработкой осадка лептоспир 0,025% раствором глютарового альдегида. Агглютинирующая активность полученных серогрупповых лептоспирозных антигенов со стандартными гомологичными сыворотками колебалась в титрах 1:3200-1:12800, с сыворотками штаммов гетерологичных серогрупп - в титрах 1:25-1:400.

Для получения референс-препаратов, содержащих серогруппоспецифические противолептоспирозные антитела к используемым серогруппам L. interrogans проводили иммунизацию кроликов живыми 7-10-дневными культурами лептоспир, содержащими 1ґ108-2ґ108 кл/мл, пятикратно, с интервалом 5-7 дней, в объемах 0,5, 1,0, 2,0, 3,0 и 5,0 мл. Титры приготовленных сывороток с гомологичными лептоспирозными антигенами составляли 1:5120-1:20480, с гетерологичными антигенами - 1:25-1:200.

Основным свойством диагностического набора является его способность выявлять группоспецифические антитела к L. interrogans в сыворотках крови и других биологических жидкостях человека (и животных) за счет их взаимодействия с гомологичными антигенами. В результате образуется комплекс антиген-антитело, который выявляют с помощью микроскопирования с конденсором «темного поля» в виде специфических скоплений «пучков», «бантиков», «кос», агглютинированных (склеенных) между собой 3-5 и более лептоспир. Отсутствие агглютинации оценивают как отрицательный результат.

Используя приготовленные группоспецифические агглютинирующие лептоспирозные сыворотки, входящие в состав набора, можно дополнительно обнаруживать в исследуемом материале патогенные лептоспиры шести серогрупп, которые наиболее часто выявляются на территории республики среди людей, крупного и мелкого рогатого скота, домашних и диких животных.

Диагностические возможности разработанного набора были испытаны при исследовании 68 сывороток крови больных лептоспирозом и с диагнозом, не исключающим лептоспироз. В клиническом материале с лабораторно подтвержденным в РМА лептоспирозом (36 проб) положительные результаты с гомологичными антигенными препаратами набора получены в 100% случаев, незначительную разницу выявляли лишь в уровне антител. Диагностическая специфичность наших препаратов была высокой в отношении сывороток больных с патологией печени вирусной этиологии: у 11 больных с лабораторно подтвержденным диагнозом гепатит В и С не было выявлено ни одного положительного результата. Ложноположительные реакции отмечены у больных Лайм-боррелиозом (2 из 8, специфичность 80,0%) и сифилисом (6 из 13, специфичность 68,4%), что, очевидно, обусловлено наличием внутриродовых антигенных связей среди родственных спирохет, входящих в порядок Spirochaetales. При проведении лабораторной диагностики лептоспироза целесообразно исключить данные инфекции у больных на основании анамнеза и оценки клинических признаков заболевания.

Анализ результатов апробации разработанного диагностического препарата при скрининговом обследовании 214 сывороток крови практически здоровых людей показал, что в РМА с компонентами набора отрицательный результат отмечали в 63,1% случаев, в 32,2% была выявлена положительная реакция в титрах 1:10-1:80. В 4,7% случаев наблюдали положительную реакцию в титрах 1:160-1:320. Причем, в 60% случаев положительная реакция получена с лептоспирами серогруппы Interohaemorrhagiae. Исследование классов иммуноглобулинов, которыми представлены противолептоспирозные антитела в сыворотках крови практически здоровых людей, показало, что они были представлены преимущественно иммуноглобулинами класса G (IgG). Полученные данные свидетельствуют о перспективности использования набора для ретроспективной диагностики случаев лептоспироза.

На диагностический препарат разработана и утверждена на ученом совете института нормативно-техническая документация: Лабораторный регламент на производство диагностического набора для выявления антигена и антител к Leptospira interrogans в реакции микроагглютинации на стекле «ЛЕПТ-АГ-АТ» и Инструкция по его применению.


Область применения: клиническая и лабораторная диагностика бактериальных и вирусных инфекций.
Рекомендации по использованию: диагностический набор предназначен для обнаружения патогенных лептоспир и группоспецифических противолептоспирозных антител в сыворотке крови больных людей. Набор может быть использован для диагностики лептоспирозной инфекции в других биологических жидкос
Предложения по сотрудничеству: производство экспериментальных серий диагностического набора для проверки его эффективности в практике здравоохранения с привлечением Республиканского и областных ЦГЭ Министерства здравоохранения республики.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2019 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта