УДК: 616-07:061.62
Год издания: 2000

РАЗРАБОТКА ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИГЕНА И АНТИТЕЛ К ВОЗБУДИТЕЛЮ ЛЕПТОСПИРОЗА В НЕПРЯМОЙ РЕАКЦИИ ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНЦИИ

Капитулец С.П.Якуба А.И.Капитулец Н.Н.Тарасова Т.А.Петкевич А.С.
Рубрики: 76.03.4376.35.33
Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: «Сероэпидемиологический анализ лептоспирозов в Республике Беларусь».
Сроки выполнения НИР: январь 1999 г. - декабрь 2001 г.
Научный руководитель: канд. мед. наук А.С. Петкевич.

Сходство ряда клинических симптомов лептоспироза - острого инфекционного зоонозного заболевания, вызываемого возбудителями рода Leptospira - с симптомами других заболеваний (грипп, гепатит, геморрагические лихорадки, иерсиниоз и др.), разнообразие клинических проявлений болезни часто затрудняет постановку диагноза. Точный диагноз может быть установлен на основании клинических данных с учетом эпидемиологического анамнеза и обязательно должен быть подтвержден лабораторно.

Наши исследования были направлены на разработку отечественной иммунофлуоресцентной тест-системы для диагностики лептоспироза, что является импортозамещающей и валютосберегающей разработкой.

Основой разработанной тест-системы является комплексный антиген L. interrogans, иммобилизованный на поверхности лунок предметных стекол, специально предназначенных для постановки непрямой реакции иммунофлуоресценции (нРИФ). Нами отработана технология получения комплексного антигена, обладающего широким диапазоном внутриродовых и внутригрупповых антигенных связей. Таким требованиям отвечал антиген, приготовленный путем двухэтапного центрифугирования микробных клеток патогенных лептоспир серогрупп Interohaemorrhagiae (шт. M-20), Canicola (шт. Каширский), Pomona (шт. Pomona), Grippotiphosa (шт. Москва-5), Тarassovi (шт. Перепелицын), Hebdomadis (шт. Hebdomadis) с последующим их объединением (в равных частях) и фиксацией на стекле с использованием охлажденного ацетона.

В качестве положительной контрольной сыворотки К+, содержащей родо- и группоспецифические противолептоспирозные антитела, в тест-системе используется полирецепторная сыворотка, полученная путем объединения трех моносывороток больных с лабораторно подтвержденным диагнозом лептоспироз, обусловленным лептоспирами серогрупп Grippotiphosa, Hebdomadis и Interohaemorrhagiae, с титром антител не ниже 1:800.

Основным свойством диагностической тест-системы является ее способность выявлять родоспецифические антитела к L. interrogans в сыворотках крови и других биологических жидкостях человека за счет их взаимодействия с иммобилизованным на стеклах комплексным антигеном. Образованный комплекс антиген-антитело выявляют с помощью антивидовой сыворотки, меченной флуоресцеин-изотиоционатом (ФИТЦ), содержащей антитела против иммуноглобулинов человека, дающей четко выраженное изумрудно-зеленое свечение большинства лептоспир в люминесцентном микроскопе. Слабое зеленоватое, желтоватое или красноватое свечение антигена, а также отсутствие люминесценции оценивают как отрицательный результат.

Кроме того, тест-система позволяет обнаруживать патогенные лептоспиры при лептоспиросемии на ранних этапах заболевания. Для этого в лунки прилагаемых к системе чистых стекол наносят каплю клинического материала или готовят мазок-отпечаток исследуемого органа, высушивают на воздухе, фиксируют в ацетоне и обрабатывают специфической антисывороткой, а затем антивидоспецифическим конъюгатом, меченным ФИТЦ. Оценку результатов исследования проб проводят на основании яркости флуоресценции и выявления характерной морфологии лептоспир. Специфическая зеленая флуоресценция в контролях должна отсутствовать.

Диагностические возможности разработанной тест-системы были испытаны при исследовании 10 сывороток крови больных с подозрением на лептоспироз и 103 сывороток практически здоровых людей, полученных из отдела особо опасных инфекций Могилевского областного центра гигиены и эпидемиологии. Для сравнения использовали коммерческий диагностикум «ЛЕПТОСПИРА Байрам-Али СЛАЙД АНТИГЕН (БАСА)» производства НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН РФ (АО «Финист», Москва). Как специфичность, так и чувствительность нашей тест-системы была сравнима и не уступала известному аналогу. Однако тест-система для диагностики лептоспироза в нРИФ выгодно отличается от существующей большим числом выявляемых серогрупп возбудителя и увеличением спектра предлагаемых возможностей.

На диагностическую тест-систему разработана и утверждена на ученом совете института нормативно-техническая документация: Лабораторный регламент на производство диагностической иммунофлуоресцентной тест-системы «ЛептоФлуоСкрин» для выявления антигена и антител к возбудителю лептоспироза и Инструкция по ее применению.


Область применения: клиническая и лабораторная диагностика бактериальных и вирусных инфекций.
Рекомендации по использованию: диагностическая тест-система предназначена для серологической диагностики лептоспироза, а также эпидемиологического обследования сывороток людей в очагах заболевания. Используя компоненты тест-системы, можно проводить обнаружение в клиническом материале л
Предложения по сотрудничеству: производство экспериментальных серий диагностической тест-системы для проверки ее эффективности в практике здравоохранения с привлечением Республиканского и областных ЦГЭ Министерства здравоохранения республики.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2019 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта