В настоящее время существуют весьма противоречивые мнения о роли нетоксигенных изолятов C. diphtheriae. В последние годы в ряде стран Европы регистрируются случаи заболеваний, которые связывают с нетоксигенными вариантами C. diphtheriae. В России описаны тяжелые формы дифтерии, которые также связывают с обнаружением нетоксигенных C. diphtheriae. Хотя сегодня все факторы патогенности нетоксигенных C. diphtheriae не установлены, однако подтверждение рядом авторов наличия в их геноме гена репрессора, регулирующего токсинопродукцию, характеризует их как потенциальный резервуар токсигенности.

Цель работы - охарактеризовать на фено- и генотипическом уровнях нетоксигенные изоляты C. diphtheriae, циркулирующие в республике.

Для обнаружения фрагмента А tox-гена в полимеразной цепной реакции (ПЦР) были изучены 179 нетоксигенных изолятов C. diphtheriae, выделенных от двух больных, 77 контактных лиц в очаге инфекции, а также от 100 больных ангинами. Риботипирование с использованием BstEII и фаготипирование с использованием первоначальной и дополнительной типирующих схем проведены у 30 изолятов C. diphtheriae, несущих фрагмент А tox-гена.

В популяции C. diphtheriae, циркулирующих в 1996-1997 гг., нетоксигенные изоляты составляли 58%, при этом достоверно чаще они выделялись среди биотипа mitis, чем среди gravis (90,6% против 37,7%). Анализ нетоксигенных изолятов C. diphtheriae в ПЦР с праймерами для выявления фрагмента А tox-гена показал неоднородность популяции циркулирующих нетоксигенных штаммов. Среди них выявлены токсиннегативные в Elek и тестах реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), но несущие tox-ген изоляты C. diphtheriae. В основном они были представлены биотипом mitis - 83,3%, лишь 16,7% составлял биотип gravis. Достоверно чаще эти изоляты выявлялись среди больных ангинами, чем среди контактных лиц в очаге (21,0% против 9,1%, p < 0,05). Риботипирование 30 изолятов C. diphtheriae, несущих фрагмент А tox- гена, в т.ч. 5 изолятов биотипа gravis и 25 биотипа mitis, выявило их гетерогенность по генетической структуре. В то же время большинство из них принадлежало к двум риботипам Mogilev 1 50,0% и Suomi 16 23,0%. Другие три риботипа (Suomi 14, Bangladesh, Murmansk 4a) включали 1-4 изолята. Более половины нетоксигенных изолятов, несущих tox-ген, не типировались фагами и являлись лизорезистентными. Генетическая идентичность четырех из них, восстановивших токсинопродукцию, штаммам, доминирующим среди токсигенных изолятов биотипа gravis Murmansk 4a, позволила отнести их к числу изолятов с низкой токсинопродукцией, которая не выявляется в Elek и РНГА-тестах, а не в группу C. diphtheriae, восстановивших токсинопродукцию, как ранее нами предполагалось. Остальные 26 изолятов C. diphtheriae при пассировании на модифицированной среде ОТДМ не проявляли токсинопродукции.

Дальнейшее изучение молекулярно-генетических механизмов регуляции токсинообразования у фенотипически нетоксигенных, но несущих tox-ген изолятов и выявление их эпидемиологической значимости имеет большое значение.