Цель работы - разработать и обосновать метод дозированной элиминации Т-лимфоцитов из донорского трансплантата и применения такролима (FK-506) для снижения риска развития острой реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ) при аллотрансплантации костного мозга (АТКМ).

Одной из основных причин увеличения частоты рецидивов после аллотрансплантации лишенного Т-лимфоцитов костного мозга, является недостаток Т-клеток и как результат - отсутствие реакции «трансплантат против лейкоза» (РТПЛ). Введение лейкозреактивных Т-клеток пациентам после АТКМ может обеспечить развитие реакции РТПЛ. На модели экзогенного селезеночного колониеобразования нами подобрано оптимальное количество лимфоцитов, способных индуцировать развитие острой РТПХ I степени тяжести (10ґ10⁵/кг веса), а также оптимальная доза такролима - 1 мг/кг/день. Препарат назначали в течение 5 суток с первого дня АТКМ.

Моделью острой РТПХ служила общепринятая методика АТКМ линейных мышей, отличающихся по Н-2 локусу гистосовместимости. Т-деплецию проводили разработанным нами методом иммуномагнитосепарации. Подготовительный режим реципиентов включал тотальное облучение тела (ТОТ) g-лучами в дозе 10 Гр. Были поставлены серии опытов: I - трансплантация полностью очищенного от Т-лимфоцитов костного мозга (ТОКМ) + дозированное введение лимфоцитов (ДВЛ) + такролим (опыт); II - ТОКМ (контроль); III - трансплантация неочищенного костного мозга (ТНКМ) (контроль); IV - ТОКМ + ДВЛ (контроль); V - ТНКМ + такролим (контроль); V - гамма-облучение (контроль).

Комбинированное применение ДВЛ и такролима на фоне полной деплеции Т-лимфоцитов из костного мозга показало стабильность селезеночного индекса и высокий процент выживаемости (57%) в течение 45 суток (период развития острой РТПХ) в сравнении с контрольными сериями, где раздельно применяли ДВЛ и такролим. Уровни апоптоза гепатоцитов и кератиноцитов в опытной серии были достоверно ниже, чем в контрольных сериях, наблюдалось незначительное повышение их показателей на 35-45 сутки. Гистологические изменения в коже и печени при этом соответствовали морфофункциональной картине острой РТПХ I степени тяжести. В печени - незначительная инфильтрация паренхимы лимфоидными элементами с умеренным венозным полнокровием и расширением синусоидных капилляров. В коже эпидермис был практически не изменен, апоптоз кератиноцитов встречался лишь один раз за время наблюдений.

Достоверно меньший уровень апоптоза (кератиноциты 4,1-6,0%, гепатоциты 6,2-8,7%) при комбинированном методе профилактики острой РТПХ позволяет судить об умеренной выраженности реактивности лимфоцитов, трансплантируемых дозировано, и вызывающих развитие острой РТПХ I степени тяжести как эффект РТПЛ. Так, введение реципиентам Т-лимфоцитов приводит к увеличению апоптоза гепатоцитов и кератиноцитов, в свою очередь индукция РТПЛ стимулирует индукцию программы апоптоза в лейкозных клетках, являясь механизмом подавления этого заболевания, а терапия такролимом в дозе 1мг/кг/день, приводящая к противоположному эффекту, позволяет удерживать эти реакции в рамках, обеспечивающих приживление и функционирование трансплантата.