|
УДК: 615.012:316.018.46
Год издания: 2000
ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ЭКСТРЕМАЛЬНЫХ ФАКТОРОВ НА АПОПТОТИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ И КЛЕТОЧНЫЙ ЦИКЛ МОНОНУКЛЕАРОВ ЧЕЛОВЕКА
Кривенко С.И., Левин В.И., Кушнерова Г.И., Миланович Н.Ф., Смольникова В.В.
Рубрики: 76.29.33
Научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови
Тема НИР: «Роль нарушений клеточного цикла и апоптотических процессов в формировании неэффективного гемопоэза и развитии полирезистентности опухолевых клеток».
Сроки выполнения НИР: январь 1999 г. - декабрь 2001 г.
Научный руководитель: канд. мед. наук С.И. Кривенко.
Целью работы явилось изучение влияния различных экстремальных факторов (облучение, цитокины, иммуноглобулины, цитостатические препараты) на клеточный цикл и апоптоз мононуклеаров человека.
Открытие в 1978 г. апоптоза как одного из физиологических механизмов гибели клеток крови существенно расширило представления о сложных процессах поддержания гомеостаза организма. Учитывая особую роль в них кроветворных клеток-предшественников и иммунокомпетентных клеток, естественным был большой поток информации, полученной в последние годы, о выраженности апоптоза мононуклеаров в норме, при различных патологических состояниях и ряде экстремальных воздействий. Установлены не только его физиологические нормы, но и отклонения в сторону как увеличения, так и уменьшения выраженности при развитии патологии, вызванной рядом факторов. При этом имеющиеся данные о диагностической ценности и возможности коррекции обнаруженных изменений уровня апоптоза лимфоцитов для повышения эффективности проводимой терапии и нормализации функций иммунной системы организма при различных заболеваниях путем воздействия на этот процесс неоднозначны.
В качестве объекта исследования использовались мононуклеары костного мозга и периферической крови, обогащенные стволовыми кроветворными (CD 34+) клетками. Клетки в концентрации 3 млн/мл инкубировались в течение 1 часа при 37°С в присутствии исследуемых факторов. Процент апоптотических клеток учитывался спустя 24 и 48 часов культивирования с использованием проточного цитофлуориметра «ФАКСкан» (Becton Dickinson, США). Параллельно на нем же оценивалось количество лимфоцитов в S-фазе клеточного цикла.
Показано, что все изучаемые факторы влияют на пролиферативную активность и выход в апоптоз мононуклеаров. Облучение в дозе 1 Гр увеличивало выход клеток в апоптоз и снижало их пролиферативную активность, что оценивалось по численности клеток в S-фазе и их способности к колониеобразованию в агаровых культурах. ФНО (цитокин преимущественно ингибирующего действия) увеличивал выход в апоптоз, повышал число клеток в синтетической фазе клеточного цикла и угнетал колониеобразование кроветворных предшественников в агаре. Смесь кроветворных факторов роста (ГМ-КСФ, ЭПО, ИЛ-3) также увеличивала выход в апоптоз, уменьшала численность клеток в S-фазе и не влияла на колониеобразование в культуре. Все цитостатические препараты (лейкеран, милеран, циклофосфан) увеличивали апоптоз и ингибировали пролиферацию в культурах. Что касается влияния цитостатиков на клеточный цикл, то полученные данные несколько противоречивы и требуют дальнейшего изучения.
Одним из разделов данного исследования явилось изучение влияния на апоптоз лимфоцитов препаратов внутривенного иммуноглобулина (коммерческие препараты лимфоглобулин и тимоглобулин (Pasteur Merieux, Франция)). Одновременно оценивалось и их влияние на клеточный цикл по выходу лимфоцитов в S-фазу.
Установлено однонаправленное влияние обоих изученных препаратов на апоптоз. Внесение их в культуральную среду приводило к замедлению апоптотических процессов. При этом выраженность эффекта для тимоглобулина через 24 часа была выше. К 48 часам культивирования воздействия обоих препаратов сравнивались. Напротив, анализ данных по количеству лимфоцитов в S-фазе клеточного цикла показал, что как через 24, так и через 48 часов от начала культивирования эффекты воздействия лимфоглобулина и тимоглобулина были противоположны: лимфоглобулин замедлял, а тимоглобулин увеличивал выход клеток в S-фазу. При этом следует отметить, что показатель жизнеспособности клеток был на протяжении всего периода культивирования в пределах 93-97%. Полученные данные свидетельствуют о необходимости дифференцированного подхода к назначению изучаемых иммуноглобулинов при заболеваниях с нарушениями иммунологического статуса различного генеза.
Область применения: гематология, иммунология.
Рекомендации по использованию: результаты исследования могут использоваться в НИИ гематологии и переливания крови, а также в других НИИ и ЛПУ республики, при подборе терапии, в частности для оценки чувствительности опухолевых клеток к действию цитостатиков.
Предложения по сотрудничеству: консультативная помощь, совместные исследования.