Разработана методика определения уровня антител к основному белку миелина методом твердофазного иммуноферментного анализа. В качестве антигена использовался Myelin Basic Protein (MBP) M-1891 lot 8711781 «Sigma».

Анализы производились с применением 96-луночного планшета Linbro (lot 0140213). Вначале вносился МВР в концентрации 10 мкг/мл на лунку в буфере для сенсибилизации (0,2 моль Nа-карбонатно-бикарбонатный буфер, рН 9,6) и оставлялся на ночь при +4 єС.

После трехкратной отмывки в 0,3 моль NаСL + 0,1 моль РВS + 0,02 моль Tween-20 вносился блокирующий раствор 1% BSA + 0,3 моль NaCL по 100 мкл на лунку на 30 мин при комнатной температуре, затем добавлялись сыворотки больных рассеянным склерозом (РС) в разведении 1:4 по 100 мкл/лунку в буфере 0,3 моль NaCL + 0,1 моль PBS. Инкубация 1 час при встряхивании. Далее производилась трехкратная отмывка буфером 0,3 моль NaCL + 0,1 моль PBS + 0,02 моль Tween-20 и трехкратная отмывка Н₂О (бидистиллят).

Разводили конъюгат в 1% BSA + 0,1 моль PBS до конечной концентрации 1:600. Вносили по 100 мкл/лунку и инкубировали 1 час при комнатной температуре.

Когда появлялась цветная реакция, вносили по 100 мкл/лунку стоп-реагента (5% серную кислоту или 1 N ее раствор). Учет результатов производился на спектрофотометре при длине волны 492 нм.

При каждой серии исследований с применением 96-луночного планшета Linbro (lot 0140213) определялась оптическая плотность приготовленного раствора, сывороток доноров и больных рассеянным склерозом. При использовании различных разведений (1:2; 1:4; 1:8) сывороток больных и доноров установлено, что наиболее видоспецифичным является связывание антигена и антитела при разведении 1:4. Сыворотки больных и доноров исследовались в трехкратной последовательности, вычислялись средние значения их оптической плотности при разведении 1:4.

По разработанной нами методике обследовано 38 доноров и 62 больных РС. Выявлена тесная корреляция между уровнем распада миелина в сыворотке крови больных и наличием антител к основному белку миелина. При этом низкий распад миелина (7,6 ± 1,2 ед.) по сравнению с группой доноров (3,9 ± 0,82 ед.) сопровождался наличием антител к основному белку миелина у 11 (42,3%) из 26 больных РС; умеренно выраженный распад (22,1 ± 0,86 ед.) - у 26 (89,6%) из 29 исследуемых; высокий - у всех исследуемых (7 человек).

Полученные данные свидетельствуют о высокой диагностической значимости метода и возможности оценки активности демиелинизирующего процесса по уровню антител к основному белку миелина, а также целесообразности назначения иммунокорригирующей терапии при данной патологии.