УДК: 577.12:577.15
Год издания: 2001

ЭНДОНУКЛЕАЗНАЯ АКТИВНОСТЬ СУБЪЕДИНИЦ ФАКТОРА РОСТА НЕРВОВ

Никандров В.Н.Пыжова Н.С.Лукашевич В.С.
Рубрики: 76.03.41
Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: «Раскрыть новые механизмы регуляции протеолиза на молекулярном и клеточном уровнях».
Сроки выполнения НИР: январь 1999 г. - декабрь 2001 г.
Научный руководитель: д-р биол. наук, проф. В.Н. Никандров.
Соисполнители: Институт физиологии НАНБ.

Методом лизиса ДНК селезенки быка (или тРНК) в тонком слое агара с последующей визуализацией после обработки 2N НСlО4 показано, что очищенные гомогенные (по данным электрофореза и изоэлектрофокусирования в полиакриламидном геле) образцы a-, b- и g-субъединиц фактора роста нервов из подчелюстной слюнной железы мышей обладают ДНК-азной и РНК-азной активностью в 0,06 моль фосфатном или 0,05 моль трис-НCl буфере при рН 7,6.

Исследование зависимости «концентрация субъединиц - активность» выявило, что ДНК-азная и РНК-азная эндонуклеазная активность проявляется у b-субъединицы при более низких концентрациях, чем у a- и g-субъединиц. Однако эта зависимость у b-субъединицы имеет вид кривой с насыщением, тогда как активность a- и g-субъединиц изменяется фактически линейно в широком диапазоне концентраций. Изучен эффект ионов Са2+, Мg2+, Mn2+, Co2+, Cu2+, Fe2+, а также ЭДТА, цитрата, арсенита, L-лизина, L-гистидина и L-аргинина в конечной концентрации 10-3 моль на проявление эндонуклеазной активности всех трех субъединиц. Установлено, что характер действия перечисленных эффекторов зависит от используемой буферной системы. ДНК-азная активность a-субъединицы в трис-буфере умеренно угнеталась лишь ЭДТА, ионами Cu, Co, Fe и Mg (на 20-35%). В фосфатном буфере все эффекторы подавляли эту активность на 50-65%. ДНК-азная активность b-субъединицы в трис-буфере на 20-35% угнеталась ионами Ca, Mg, Mn, Co, Cu и на 20-25% повышалась в присутствии цитрата, ЭДТА, арсенита, лизина и аргинина. Однако в фосфатном буфере лишь цитрат, ЭДТА, арсенит и ионы Сu вызывали увеличение ДНК-азной активности. Эта же активность b-субъединицы в трис-буфере лишь в присутствии цитрата, ЭДТА и аргинина увеличивалась на 20-40%. В фосфатном буфере почти все эффекторы вызвали умеренное (на 20-40%) подавление этой активности (кроме ионов Са, Со, аргинина), а ионы Сu - ее повышение.

РНК-азная активность a-субъединицы в трис-буфере угнеталась лишь ионами Fe на 30%, тогда как в фосфатном буфере эффективны были только добавки арсенита или лизина: активность возрастала на 30-40%. РНК-азная активность b-субъединицы малочувствительна к эффекторам. В трис-буфере она на 20% подавлялась ионами Ca и Mg и на 70% увеличивалась в присутствии ионов Cu. В фосфатном буфере лишь ЭДТА вызывал небольшое угнетение этой активности. РНК-азная активность g-субъединицы в трис-буфере подавлялась только ионами Са (на 20%), тогда как в фосфатном буфере все используемые катионы металлов вызвали ее угнетение на 20-45%. Следовательно, все субъединицы фактора роста нервов способны гидролизовать ДНК и РНК. Различия действия эффекторов на эндонуклеазную активность субъединиц свидетельствуют о том, что эта активность, по-видимому, обусловлена разными каталитическими свойствами субъединиц фактора роста нервов, а не загрязнениями тканевыми эндонуклеазами. Это дает основания предполагать наличие у исследуемых субъединиц нового функционального свойства.


Область применения: энзимология, биология клетки, экспериментальная нейробиология, нейрофармакология, нейротрансплантология.
Рекомендации по использованию: на основе оригинальных данных в перспективе возможна разработка приемов тестирования субъединиц фактора роста нервов, раскрытие молекулярных механизмов биологического действия этого фактора, а также обоснование подходов и дальнейшая разработка миметически
Предложения по сотрудничеству: возможна организация совместного производства белковых гидролизатов и микробиологических сред с заинтересованными партнерами в Республике Беларусь, странах СНГ и дальнего зарубежья.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2019 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта