УДК: 61: 578.7
Год издания: 2002
МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ПЕРСИСТЕНТНЫХ ЭНТЕРОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ ЧЕЛОВЕКА
Амвросьева Т.В., Поклонская Н.В., Дьяконова О.В.
Рубрики: 76.03.41
Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: «Разработка эффективных схем и тест-систем для лабораторной диагностики различных форм энтеровирусной инфекции человека».
Сроки выполнения НИР: 1999–2001 гг.
Научный руководитель: д-р мед. наук Т.В. Амвросьева.
Энтеровирусы (ЭВ) являются пантропными инфекционными агентами, способными поражать практически все органы и ткани человека. Именно этим обстоятельством определяется столь широкий спектр вызываемых ими заболеваний. Вовлечение в патологический процесс различных органов и систем — центральной нервной (менингиты, полиомиелиты), желудочно-кишечной (гастроэнтериты, диареи), дыхательной (герпангины, ОРВИ), сердечно-сосудистой (мио-, перикардиты, ДКМП) и др. — требует индивидуальных подходов в выборе адекватных диагностических методов. Так, например, выделение ЭВ из ликвора больного однозначно указывает на их этиологическую роль в серозном менингите. В то время как выделение вируса из фекалий больного с симптоматикой ДКМП не является репрезентативным диагностическим показателем. Таким образом, для каждой клинической формы необходимо разработать свою схему диагностики, которая, с одной стороны, должна базироваться на современных достижениях мировой науки, а с другой — учитывать возможности практической лабораторной службы в плане ее доступности, репрезентативности и технологичности.
Исходя из вышеизложенного, предметом нашего внимания был поиск оптимальной схемы диагностики персистентных форм энтеровирусной инфекции (ЭВИ). На основании анализа собственных и литературных данных нами была разработана схема диагностики такого рода ЭВИ, включающая 2 этапа. Первый этап — исследование сыворотки крови больного для проведения экспресс-диагностики антиэнтеровирусных IgM. Получение положительных результатов является показанием к проведению дальнейших исследований, включающих определение 4-кратного нарастания титров вируснейтрализующих антител в парных сыворотках и выделение вируса на культурах клеток. Положительные результаты, полученные на первом этапе, указывают на наличие в организме больного активной ЭВИ. Второй этап проводится для доказательства присутствия активной ЭВИ в пораженном органе и включает исследования его биоптатов с привлечением молекулярно-биологических и иммуногистохимических методов. Обнаружение антигена ЭВ in situ является прямым доказательством присутствия ЭВ в пораженном органе или биологической жидкости, однако не является доказательством активного инфекционного процесса. Предлагаемый нами подход базируется на обязательном определении маркеров инфекционного ЭВ, свидетельствующих о наличии в пораженных клетках активного инфекционного процесса и включает количественную модификацию ПЦР с последующим определением соотношения позитивной и негативной РНК ЭВ. Если «-» РНК представлена в количестве, равном или превышающем «+» РНК, можно с уверенностью говорить о наличии в пораженном органе активной персистентной ЭВИ.
Таким образом, в основе разработанной схемы диагностики персистентной ЭВИ лежит комплексный дифференцированный подход, предполагающий использование определенного набора вирусологических, серологических, молекулярно-биологических и иммуногистохимических методов исследований. Особое внимание в разработанной схеме уделено адекватному учету полученных результатов, которые оцениваются как положительные, исходя из принятых в мировой практике критериев регистрации активной ЭВИ.
Область применения: вирусология, лабораторная диагностика.
Рекомендации по использованию: разработанная схема может быть внедрена в клиническую вирусологическую диагностику.
Предложения по сотрудничеству: консультативная помощь при внедрении.