УДК: 577.152.34:577.15.025:577.122
Год издания: 2002

ЭНЗИМАТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ БЕЛКОВ ИНГИБИТОРОВ ПРОТЕИНАЗ

Никандров В.Н.Пыжова Н.С.
Рубрики: 76.03.41
Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: «Раскрыть новые механизмы регуляции протеолиза на молекулярном и клеточном уровнях».
Сроки выполнения НИР: 1999–2001 гг.
Научный руководитель: д-р биол. наук, проф. В.Н. Никандров.

Методом лизиса фибриновых пластин показано, что образцы ингибитора трипсина из соевых бобов (SBTI, Reanal), овоингибитора (Reanal) или овомукоида (Олайне) куриного яйца лишены плазминогенактиваторной активности. Однако SBTI и овоингибитор способны медленно гидролизовать фибрин в отсутствие нативного плазминогена при рН 7,4. Овомукоид такой способности лишен. Фибринолитическая активность SBTI полностью подавлялась добавками фенилметилсульфонилфторида, р-хлормеркурибензоата, о-фенантролина и ЭДТА в конечной концентрации 10–3 моль, а также стрептокиназой. Фибринолитическая же активность овоингибитора проявлялась только в присутствии стрептокиназы. Эта активность нечувствительна к фенилметилсульфонилфториду, лишь частично угнеталась р-хлормеркурибензоатом (на 44–64%) и полностью — о-фенантролином или ЭДТА. Причем проявляющаяся в присутствии стрептокиназы протеиназа не расщепляла специфический хромогенный субстрат плазмина S-2251. Все три белка ингибитора способны медленно гидролизовать один из основных белков животного происхождения. В случае SBTI (слабая) или овомукоида (наиболее выраженная) эта способность угнеталась добавками стрептокиназы на 40%, а в экспериментах с овоингибитором — усиливалась в 2–6 раз.

Методом биохемилюминесценции в системе «H2O2 — люминал» при рН 7,4 зафиксировано образование активных форм кислорода при разложении H2O2 SBTI и в меньшей степени овоингибитором. Овомукоид обладает лишь 7% подобной активности в сравнении с SBTI, судя по амплитуде начальной вспышки. Все три белковых ингибитора протеиназ проявили способность окислять в атмосфере воздуха адреналин с образованием адренохрома, что сопряжено с генерированием супероксидных радикалов. Наиболее высока эта способность у SBTI. Кроме того, исследуемые белки подавляли восстановление нитротетразолиевого синего в стандартной системе генерирования супероксидных радикалов «NADH-фенозинметосульфат» в 0,052 моль пирофосфатном буфере рН 8,3. Супероксидконвергирующая способность SBTI, овоингибитора и овомукоида составляла 41%, 39% и 30% соответственно.

Наконец, методом лизиса ДНК селезенки быка или т-РНК в тонком слое агара при рН 7,6 с последующей визуализацией путем обработки 2N HClO4 во всех образцах обнаружена ДНК-азная (примерно одинаковая) и РНК-азная (максимальная у SBTI, вдвое меньшая у овомукоида) активность.

Полученные принципиально новые характеристики трех белковых ингибиторов протеиназ заставляют переосмыслить результаты разнообразных биологических экспериментов с применением этих ингибиторов. Кроме того, возникает вопрос, во-первых, об обнаруженных фактах как о неотъемлемых свойствах этих белков или же о наличии трудно удаляемых примесей, во-вторых, о возможности проявления подобных и ряда других необычных свойств у иных белков ингибиторов протеиназ.


Область применения: энзимология, экспериментальная биология, экспериментальная медицина, фармакология.
Рекомендации по использованию: полученные факты следует учитывать при применении белковых ингибиторов протеолиза в клинической и экспериментальной медицине и создании лекарственных препаратов на их основе.
Предложения по сотрудничеству: совместные исследования природы энзиматической активности ингибиторов с Институтами биохимии, биоорганической и физической химии НАНБ, стран СНГ и дальнего зарубежья.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2019 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта