![]() |
УДК: 616–002.5–078.814
Год издания: 2003
УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ПЛОТНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА
Кузнецов О.Е., Гельберг И.С.
Рубрики: 76.03.43, 76.29.53
Гродненский государственный медицинский университет
Тема НИР: «Усовершенствование плотных питательных сред для бактериологической диагностики туберкулеза».
Сроки выполнения НИР: январь 2003 г. — декабрь 2005 г.
Научный руководитель: д-р мед. наук, проф. И.С. Гельберг.
Цель исследования — разработка новых, более дешевых и эффективных питательных сред для выявления микобактерий туберкулеза (МБТ) и определения лекарственной чувствительности.
Трудности выделения МБТ из патологического материала связаны с биологическими особенностями возбудителя (медленность роста), а также со снижением жизнеспособности микобактерий в результате применения антибактериальных препаратов и различных методов обработки при посеве материала. Имеющееся большое количество питательных сред далеко не всегда отвечает необходимым требованиям, многие являются дорогостоящими, как и наиболее часто употребляемая среда Левенштейна — Йенсена.
Целью работы было создание более дешевой питательной среды с сохранением качества исследования и ускорение роста МБТ.
Поставленная задача решается путем создания яично-овощной плотной питательной среды (Кузнецова), созданной на базе среды Левенштейна — Йенсена со значительным уменьшением дорогостоящих ингредиентов и добавлением отваров белой фасоли и моркови.
При подборе ингредиентов для нее исходили из того, чтобы обеспечить нужное количество и качество белкового состава за счет фасоли и яиц, углеводов — за счет картофеля, витаминов — за счет моркови.
Предлагаемая среда хорошо сворачивается, не отстает от стенок пробирок и по внешним свойствам (цвет) напоминает среду Левенштейна — Йенсена. Приготовленный фильтрат отваров белой фасоли, картофеля и моркови может храниться при 0–4° C в течение 3 мес., не изменяя своих свойств.
Были проведены сравнительные испытания яично-овощной среды и среды Левенштейна — Йенсена в отношении роста МБТ. Провели 22 сравнительных посева чистой культуры М. tuberculosis (H37RV) на яично-овощную среду и на среду Левенштейна — Йенсена. Было установлено, что чистая культура МБТ растет на яично-овощной среде так же хорошо, как и на среде Левенштейна — Йенсена (75% роста на 7-й день, 100% роста на 8-й день инкубации). Цвет и форма колоний
МБТ на обеих средах идентичны друг другу. Массивность роста на 7–8-й день инкубации несколько выше на среде Кузнецова.
Было произведено 80 сравнительных посевов мокроты от пациентов, страдающих туберкулезом (бактериовыделителей), установлено следующее:
– скорость первичного роста МБТ на яично-овощной среде идентична таковой на среде Левенштейна — Йенсена;
– рост во всех пробирках на обеих средах идентичен друг другу и одновременен.
Для ускорения роста МБТ было решено использовать простой и доступный способ, включающий в себя замораживание и оттаивание среды. Способ осуществляют следующим образом: разлитую по пробиркам и свернутую среду Левенштейна — Йенсена замораживают в морозильной камере бытового холодильника при температуре –10–12° С в течение 16–20 ч. Полноту замораживания среды контролируют визуально. Затем среду оттаивают при комнатной температуре в течение 2–2,5 ч до полного оттаивания, после чего сразу производят посев исследуемого материала.
Время замораживания 16–20 ч обосновано тем, что за меньшее время не достигается полное замораживание среды.
Для контрольных исследований использовали не подвергавшуюся замораживанию среду.
Выделение культуры в срок до 10 дней произошло в 8 случаях (87%) в опытной группе и не выявлено в контрольной группе (р < 0,05). До 20 дней — 73,9 и 57,1% соответственно (р < 0,05). Из 104 посевов рост культуры в опытной группе получили в 92 случаях, в контрольной — в 84.
Таким образом, предлагаемая плотная яично-овощная среда обеспечивает культивирование МБТ аналогично среде Левенштейна — Йенсена, при этом стоимость яично-овощной питательной среды в 2,5–3,5 раза ниже стоимости среды Левенштейна — Йенсена. Предлагаемый способ ускорения роста микобактерий путем замораживания и оттаивания действительно позволяет ускорить рост МБТ, что приведет к повышению эффективности бактериологической диагностики туберкулеза. Способ прост в исполнении, эффективен и может быть использован в любой фтизиатрической клинике.
Область применения: микробиология, фтизиатрия.
Рекомендации по использованию: возможно использование в бактериологических лабораториях Республики Беларусь и за ее пределами.
Предложения по сотрудничеству: подана заявка на изобретение. После получения приоритетной справки возможна продажа с подробным описанием методики, консультативная помощь при внедрении.