Нарушение контроля апоптоза является решающим событием в характерном для хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ) накоплении на ранней G1-фазе длительно живущих В-клеток. В связи с этим нами проведено исследование выраженности процессов спонтанного апоптоза в лимфоцитах пациентов после культивирования клеток в течение 24 и 48 ч (с помощью метода флуоресцентной микроскопии по характерной морфологии клеточных ядер после окраски акридиновым оранжевым) и в условиях, приближающихся к таковым in vivo (по распределению выделенных мононуклеаров по фазам клеточного цикла на основании ДНК-гистограммы, полученной при измерении флуоресценции специфического ДНК-красителя пропидиум йодида на проточном цитофлуориметре, не позже 2 ч после извлечения клеток из организма). Проанализированы образцы лимфоцитов, выделенных из крови 18 здоровых людей (доноры крови) и 46 пациентов с В-ХЛЛ.

Среднее значение интенсивности спонтанного апоптоза для лимфоцитов доноров через 24 и 48 ч культивирования составляет соответственно 4,2 ± 0,6% и 10,7 ± 0,9%. Диапазон интенсивности апоптоза равен 1,0–9,6% и 6,0–19,3% (соответственно через 24 и 48 ч). Для лейкемических клеток эти показатели составляют 13,8 ± 2,3% и 19,7 ± 3,6%; дисперсия — соответственно 3,4 — 67,0% и 4,6 — 81,0%. Математическое распределение позволило выделить три группы пациентов по интенсивности спонтанного апоптоза в их клетках и распределить изучаемые случаи в соответствии с групповыми параметрами. Эти группы могут рассматриваться как кластеры с низкой, промежуточной и высокой интенсивностью спонтанного апоптоза клеток, причем из последней группы целесообразно выделить подгруппу с очень высокой интенсивностью спонтанного апоптоза. При сравнении лейкемических и нормальных клеток по группам с соответствующей интенсивностью спонтанного апоптоза показано, что в целом лейкемические клетки in vitro достоверно более склонны к апоптозу.

При оценке спонтанного апоптоза и анализе распределения свежевыделенных лейкемических клеток по фазам клеточного цикла получены данные, которые, как и в случаях анализа лейкемических клеток после культивирования, позволяют выделить три группы пациентов: c низким уровнем спонтанного апоптоза (или вообще с отсутствием апоптотических клеток в крови больных) — 62,5%, с промежуточным уровнем — 12,5% и с высоким уровнем спонтанно апоптозирующих клеток в крови — 25%.

По содержанию в крови больных клеток в фазах клеточного цикла S+G2+M также условно можно было выделить три группы: с низким уровнем пролиферирующих клеток (или вообще с отсутствием таковых) — 50%, с умеренным уровнем — 25% и с высоким уровнем таких клеток — 25%. При сопоставлении количества апоптотических и пролиферирующих клеток в крови больных можно было говорить о наличии пациентов с преобладанием апоптотических клеток, пролиферирующих клеток, с приблизительно равным количеством и тех, и других клеток, с инертной популяцией клеток (отсутствие или незначительное количество апоптотических и пролиферирующих клеток).

Следует отметить, что в крови здоровых лиц, исследованной с помощью метода проточной цитометрии в течение 2 ч после выделения клеток, обычно не обнаруживались апоптозирующие клетки, причем более 99% клеток находились в фазах клеточного цикла G0/G1 и лишь в 0,7% клеток содержание ДНК соответствовало таковому в клетках в стадиях клеточного цикла S+G2+M.

Таким образом, проведенные исследования показали высокую гетерогенность больных В-ХЛЛ, большинство из которых находились во 2-й или 3-й стадии заболевания по Rai по показателям интенсивности спонтанного апоптоза лейкемических клеток как непосредственно после выделения из организма, так и после культивирования.