УДК: 577.152.34:576.08.093
Год издания: 2003

СОБСТВЕННАЯ ЭНЗИМАТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД СЛОЖНОГО СОСТАВА

Никандров В.Н.Пыжова Н.С.Шатило Н.Л.
Рубрики: 76.03.41
Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: «Изучить набор внутри- и внеклеточных протеиназ у токсигенных и нетоксигенных штаммов Corynebacterium diphtheriae и взаимосвязь их с токсигенностью».
Сроки выполнения НИР: 2002–2004 гг.
Научный руководитель: д-р биол. наук, проф. В.Н. Никандров.

Исследования различных образцов неинокулированных питательных сред для культивирования коринебактерий дифтерии — бульона Мартена (пептический автолизат свиных желудков + «мясная вода», 1:1), бульона Лингуда (панкреатический гидролизат говяжьего мяса с последующим дрожжевым дображиванием) — показали наличие протеолитической и эндонуклеазной активностей, регистрируемых методом лизиса субстратов в тонком слое. Так, бульон Мартена не обладал протеолитической активностью по фибрину и казеину, однако отдельные образцы оказались способны лизировать гемоглобин. ДНК-азная и РНК-азная активности наблюдались не во всех образцах этой среды. При добавлении к бульону Мартена сыворотки крови крупного рогатого скота (10%) (не обладала протеолитической активностью) гемоглобинолитическая активность питательной среды умеренно угнеталась. Добавление данной сыворотки придавало среде эндонуклеазную активность по ДНК и РНК. Добавление эмбриональной телячьей сыворотки, обладающей казеинолитической и гемоглобинолитической активностью, а также высоким уровнем ДНК-азы и РНК-азы не приводило к проявлению в среде протеолитической активности. Удельная активность ДНК-аз и РНК-аз снижалась по сравнению с бессывороточной средой в 2–4 раза.

Бульон Лингуда при рН 7,4 обладал выраженной протеолитической активностью по фибрину и казеину, но не по гемоглобину. Введение в среду сыворотки крови крупного рогатого скота резко (на 2 порядка) снижало удельную фибринолитическую активность. Общая гемоглобинолитическая активность при этом росла. В отсутствие добавок сыворотки бульон Лингуда проявлял высокую удельную эндонуклеазную активность. Добавка в среду эмбриональной телячьей сыворотки также снижала удельную протеолитическую активность по фибрину и казеину и особенно резко удельную активность ДНК-аз и РНК-аз (на 2 порядка). Замена этих сывороток сывороткой крови лошади (обладала фибринолитической активностью) вела практически к идентичному результату.

Методом биохемилюминесценции в системе «H2O2—люминол» при рН 7,4 в отсутствие экзогенных катализаторов разрушения H2O2 установлено резкое снижение базовой (фоновой) хемилюминесценции при добавлении бульона Мартена (на 2 порядка). Эмбриональная телячья сыворотка вызывала существенное (1,9–2,1 раза) усиление хемилюминесценции. Однако при смешивании ее с бульоном Мартена кинетика тушения хемилюминесценции не отличалась от фона. Лошадиная сыворотка обусловила снижение фоновой хемилюминесценции на 40–50%. Вместе с тем, внесение в указанную систему смеси «бульон Мартена + лошадиная сыворотка» вело к падению фонового уровня хемилюминесценции на порядок. Бульон Лингуда вызывал тушение фоновой хемилюминесценции в 6–10 раз. Комбинация этой питательной среды с эмбриональной тельячьей или лошадиной сывороткой крови также вела к подобному эффекту, хотя и менее сильному.

Следовательно, несмотря на достаточно жесткие условия технологии (кипячение, автоклавирование 30 мин при 120° С) питательные среды, приготовляемые из биологических субстратов, обладают собственной протеолитической и эндонуклеазной активностью, а также, по-видимому, антиоксидантными свойствами. Обогащение питательных сред сыворотками крови измененяло эти характеристики. Не вызывает сомнения, что в зависимости от свойств сырья данные параметры могут существенно колебаться. Между тем до сих пор не проводена стандартизация питательных сред по подобным критериям. Информация об их влиянии на рост микроорганизмов и биосинтетическую активность также практически отсутствует. Это обусловливает необходимость совершенствования систем контроля и стандартизации питательных сред и углубленного исследования влияния собственной их энзиматической активности на состояние микробной популяции.


Область применения: прикладная биохимия, производство питательных сред, биотехнология.
Предложения по сотрудничеству: совместные разработки систем стандартизации и контроля питательных сред, исследования роли собственной энзиматической активности их в биотехнологии микробного синтеза с научными и производственными коллективами.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2019 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта