УДК: 616–078:57.083.133
Год издания: 2003

ХАРАКТЕРИСТИКА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ ТЕСТИРОВАНИЯ АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ ДИСКО-ДИФФУЗИОННЫМ МЕТОДОМ

Ермакова Т.С.Горбунов В.А.Блыга Е.Г.Рогачева Т.А.Паньшина Е.Ф.
Рубрики: 76.03.41
Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: «Разработать питательные среды для культивирования строгих анаэробов и капнофилов, среду для определения чувствительности к антибактериальным препаратам».
Сроки выполнения НИР: 2001–2002 гг.
Научный руководитель: чл.-корр. НАНБ, д-р мед. наук, проф. Л.П. Титов.

Диско-диффузионный метод определения антибиотикочувствительности бактерий является наиболее распространенным и доступным для микробиологических лабораторий. Однако для получения с его помощью воспроизводимых результатов необходима строгая стандартизация:
– диски из специального картона, содержащие определенное количество антибиотика, сохраняющие свою активность не менее года;
– питательная среда, стандартизованная, сохраняющая свои характеристики не менее года;
– порядок и техника проведения исследования;
– учет и оценка результатов.

Наиболее важным элементом стандартизации является питательная среда, в которой происходят два взаимопротивоположных процесса: с одной стороны, диффузия антибиотика, с другой стороны — рост и размножение микроорганизмов. Любое изменение состава среды способно привести к неадекватному результату.

В международной практике широко используется агар Мюллера — Хинтона, рекомендованный ВОЗ. В большинстве лабораторий Беларуси используется среда АГВ российского производства, для которой отсутствуют данные по интерпретации зон задержки роста стандартных микроорганизмов к ряду новых антибиотиков. Среда АГВ не всегда позволяет получать сопоставимые адекватные результаты антибиотикоустойчивости бактерий в связи с несбалансированностью содержания в ней двухвалентных катионов Са2+, Mg2+, Zn2+, тимина и тимидина.

Цель исследования — разработка и производство питательной среды для определения чувствительности бактерий к противомикробным препаратам.

Материалом исследования служили клинические изоляты, полученные от больных инфекционной клинической больницы г. Минска и эталонные штаммы E. coli ATCC 25922, S. aureus ATCC 25923, и Ps. aeruginosa ATCC 27853.

Использовали диски с антибиотиками производства НИИ ЭМ (Россия, Санкт-Петербург) и тест-систему «ЭнтероСенс-тест» (НИИ ЭМ, Беларусь, Минск).

Проведены исследования вариантов состава питательной среды для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. В результате была изготовлена среда — аналог агара Мюллера — Хинтона.

Определение чувствительности энтеробактерий к антибиотикам и учет результатов проводили согласно общепринятой методике и прилагаемым инструкциям.

Таблица 1

Диаметры зон задержки роста эталонных штаммов на изучаемых средах

Антибиотик мкг/диск Пределы колебания диаметров (мм +среднеквадратичное отклонение)
E. coli ATCC 25922 S. aureus ATCC 25923 Ps. aeruginosa ATCC 27853
Допустимые Мюллера -Хинтона АГВ Допустимые Мюллера -Хинтона АГВ Допустимые Мюллера -Хинтона АГВ
10 16-22 16,3 ± 0,1 18,0 ± 0,0 27-35 30,3 ± 0,0 29,4 ± 0,1 - - -

Хлорам-феникол

30

21-27

27,6 ± 0,0

27,6 ± 0,0 19-26 26,5 ± 0,2 25,4 ± 0,6 - - -

Гентамицин

10

19-26

23,6 ± 0,0

21,0 ± 0,0

19-27

26,3 ± 0,1

28,0 ± 0,1

16-21

16,2 ± 0,3

23,6 ± 0

Левомицетин

10

19-26

23,6 ± 0,0

21,0 ± 0,0

19-27

26,3 ± 0,1

28,0 ± 0,1

16-21

16,2 ± 0,3

23,6 ± 0

Налидиксовая кислота

30

22-28

25,3 ± 0,2

24,3 ± 0,2

- - - - - -

Рифампицин

5 8-10 10,0 ± 0,2 10,0 ± 0,1 26-34 34,3 ± 0,0 32,6 ± 0,2 - - -

Тетрациклин

30 18-25 19,0 ± 0,3 21,3 ± 0,0 19-28 28,0 ± 0,0 27,5 ± 0,5 - - -

Цефазолин

30 23-29 24,3 ± 0,0 26,0 ± 0,0 29-35 31,6 ± 0,5 25,2 ± 0,1 - - -

Цефалексин

30 15-21 17,3 ± 0,1 17,0 ± 0,4 29-37 31,0 ± 0,0 33,0 ± 0,0 - - -

Доксициклин

30 18-24 16,6+0,1 16,5+0,3 23-29 23,6+0,5 23,0+0,5 - - -

Линкомицин

15

- - - 24-30 28,2+0,3 23,0+0,1 - - -

В табл. 1 приведены результаты, полученные при сравнительном изучении зон задержки роста эталонных штаммов на средах АГВ (Россия) и агаре Мюллера — Хинтона (НИИ ЭМ, Беларусь, Минск). Из табл. 1 следует, что среда Мюллера — Хинтона агар производства НИИ эпидемиологии и микробиологии (Минск, Беларусь) является удовлетворительной по качеству, так как диаметр зон ингибиции роста референтных штаммов вокруг дисков с антибиотиками соответствует пограничным значениям, тогда как пределы колебаний зон задержки роста на среде АГВ не укладывались в допустимые.

При сравнительном испытании коммерческих дисков производства Санкт-Петербургского НИИ ЭМ (Россия) и дисков «ЭнтероСенс-тест» (НИИ ЭМ, Минск, Беларусь) на среде агар Мюллера — Хинтона производства НИИ эпидемиологии и микробиологии (Минск, Беларусь) были получены результаты, приведенные в табл. 2.

Таблица 2

Результаты сравнительного испытания коммерческих дисков и дисков «ЭнтероСенс-тест»

Антибиотик Исследовано штаммов энтеро-бактерий Из них по данным коммерческих дисков (НИИ ЭМ, Санкт-Петербург) Из них по данным дисков «ЭнтероСенс-тест» (НИИ ЭМ, Минск)
устойчивы, умеренно устойчивы чувствительны устойчивы, умеренно устойчивы чувствительны
Рифампицин 24 24 0 24 0
Гентамицин 24 24 0 24 0
Левомицетин 24 24 0 24 0
Тетрациклин 24 24 0 24 3
Цефалексин 24 24 0 21 3
Ампициллин 24 24 24 21 0
Всего (%) 144 144(100) 138 (95,8) 24 6 (4,2)

Как следует из табл. 2, среди клинических изолятов при использовании коммерческих дисков устойчивыми и умеренно устойчивыми оказались 100% (144 изолята), чувствительных не обнаружено, тогда как при использовании дисков «ЭнтероСенс-тест» лишь 95,8% оказались устойчивыми (138 изолятов), и было установлено 3 изолята, чувствительных к тетрациклину, и 3 изолята, чувствительных к цефалексину (4,2%).

Использование в практическом здравоохранении разработанной среды будет способствовать получению стандартных и воспроизводимых результатов исследований, необходимых как для определения антибиотикочувствительности отдельного штамма, так и для осуществления микробиологического мониторинга устойчивости возбудителей в рамках системы эпидемиологического надзора и предупреждения распространения устойчивых форм микроорганизмов.


Область применения: клиническая и лабораторная диагностика.
Рекомендации по использованию: результаты используются в производстве диагностической тест-системы для определения чувствительности энтеробактерий к антибиотикам.
Предложения по сотрудничеству: применение среды в бактериологических лабораториях санэпидслужбы и лечебно-профилактических учреждений.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2019 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта