Целью работы было изучение общих и отличительных черт спонтанного апоптоза лейкемических клеток в зависимости от их линейной принадлежности и степени дифференцировки. Уровень спонтанного апоптоза опухолевых клеток детей с острыми лейкозами оценивали после культивирования in vitro в течение 24 ч. Экспрессию апоптозассоциированных молекул (FasR, FasR, Bcl-2 и p53) выявляли на свежевыделенных опухолевых клетках костного мозга 115 детей с первичным острым миелоидным (ОМЛ) или острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ).

При сравнительном анализе пяти методов определения апоптотических клеток установлено, что наибольшей чувствительностью обладают методы, детектирующие ранние/промежуточные стадии апоптотических процессов: выявление морфологических изменений ядра апоптотических клеток с окрашиванием акридиновым оранжевым в присутствии бромистого этидия с использованием флуоресцентной микроскопии; определение апоптотических клеток по детекции фосфатидилсерина на внешней поверхности мембраны клетки с помощью AnnexinV-FITC-kit; выявление потери мембранного митохондриального потенциала с помощью катионного зонда JC-1; выявление разрывов ДНК с использованием APO-BrdU-kit. Выявление апоптотических клеток по гиподиплоидному количеству ДНК с окраской пропидиумом иодидом оказалось наименее чувствительным методом.

Как было выявлено далее в ходе исследования, лейкемические клетки при ОМЛ по сравнению с ОЛЛ обладают сниженной способностью к спонтанному апоптозу, сниженной экспрессией Bcl-2 и повышенной экспрессией Fas-R. В свою очередь опухолевые клетки при Т-линейном ОЛЛ характеризовались более высокой экспрессией Fas-R и меньшей экспрессией Bcl-2 по сравнению с таковыми при В-линейном ОЛЛ. Уровень спонтанного апоптоза также связан со степенью дифференцировки клеток при В-линейном ОЛЛ. Так в ряду опухолевых клеток при Common-Pre-В-Mature-В-субтипах ОЛЛ наблюдали возрастание уровня спонтанного апоптоза и снижение экспрессии Bcl-2. На опухолевых клетках различных субтипов ОМЛ наблюдали увеличение экспрессии Fas-R и снижение экспрессии Bcl-2 в ряду М0/М1-М2-М3-М4/М5. Среди субтипов ОМЛ минимальный уровень апоптоза установлен для варианта М3.