УДК: 615.012:615.316.018.46
Год издания: 2004

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МОДИФИЦИРОВАННЫХ КРИОКОНСЕРВИРУЮЩИХ СОСТАВОВ ДЛЯ ОБЕСПЕЧЕНИЯ СОХРАННОСТИ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ КЛЕТОК ПУПОВИННОЙ КРОВИ ПРИ ДЛИТЕЛЬНОМ ХРАНЕНИИ

Рябцева Е.С.Кривенко С.И.Усс А.Л.Завгородняя И.Л.Дрык С.И.
Рубрики: 76.29.33
Научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови
Тема НИР: «Разработать стандартные технологические протоколы получения, сепарации, замораживания и хранения в криобанке кроветворных клеток пуповинной крови человека на основе использования отечественных препаратов и материалов с целью создания Национального банка
Сроки выполнения НИР: январь 2002 г. — декабрь 2003 г.
Научный руководитель: канд. мед. наук С.И. Кривенко, д-р мед. наук А.Л. Усс.

Цель исследования — оценка сохранности гемопоэтических стволовых клеток в образцах пуповинной крови (ПК) при длительном хранении в криобанке при использовании различных криоконсервирующих составов с содержанием диметилсульфоксида (ДМСО) в замораживающей смеси не более 5%.

Про организации банка ПК одним из важнейших вопросов является обеспечение гарантии качества трансплантата при его длительном хранении, что во многом определяется правильным подбором режима замораживания и криопротекторов. Наиболее распространенным является метод с введением ДМСО в концентрации 10% от конечного объема замораживающей смеси. В наших экспериментах этот вариант постановки был использован в качестве контрольного.

Одновремено нами были апробированы криоконсервирующие составы, состоявшие из 5% ДМСО с добавлением 5% альбумина или 5% аутоплазмы (в перерасчете на конечный объем замораживающей смеси).

Для оценки качества образцов в процессе хранения были сформированы 4 серии (3 мес., 6 мес., 9 мес., 1 год). По прошествии вышеозначенных интервалов времени образцы ПК были разморожены. Клетки были исследова­ны на жизнеспособность в стандартном тесте с трипановым синим. Изменение пролиферативного и дифференцировочного потенциала гемопоэтических клеток в процессе хранения оценивалось по их способности к формированию колоний в полутвердых метилцеллюлозных культурах in vitro с использованием тест-системы «Stemline Complete Methylcellulose Medium» (Sigma, США).

При использовании в качестве криопротектора ДМСО в концентрации 10% (контроль) в исследованных сериях не отмечалось снижения жизнеспособности ядросодержащих клеток (ЯСК) в процессе хранения (см. табл. 1).

Таблица 1

Оценка жизнеспособности ЯСК ПК в процессе длительного хранения

Способ криоконсервирования Срок хранения
3 6 9 12
ДМСО 10% 94,14 ± 0,65 96,0 ± 0,0 95,16 ± 0,33 96,25 ± 0,25
ДМСО 5% + альбумин 5% 96,29 ± 0,32 - 96,12 ± 0,27 96,0 ± 0,0
ДМСО 5% + аутоплазма 5% 92,0 ± 0,47 - 93,0 ± 0,21 -

При использовании ДМСО в пониженных концентрациях (но не менее 5% от конечного объема) с добавлением альбумина не отмечалось существенного снижения жизнеспособности клеток в процессе хранения, а сохранность клеток была сопоставима с таковой при использовании 10% ДМСО. Введение в криоконсервирующую смесь 5% аутологичной плазмы было несколько менее эффективно, но в целом обеспечивало достаточно высокий уровень сохранности ЯСК (жизнеспособность не ниже 91%) (см. табл. 1).

Что касается пролиферативного и дифференцировочного потенциала гемопоэтических клеток, то в процессе хранения кроветворные предшественники сохраняли нормальный уровень колониеобразования со стандартным для использованной тест-системы распределением по росткам кроветворения (см. табл. 2).

Таблица 2

Пролиферативная активность гемопоэтических клеток ПК в процессе длительного хранения

Способ криоконсервирования Уровень колониеобразования в культуре
КОЕк БОЕэ КОЕ-ГМ КОЕсм
ДМСО 10% 58,59 ± 0,35 16,28 ± 0,22 35,35 ± 0,27 7,06 ± 0,11
ДМСО 5% + альбумин 5% 58,83 ± 0,37 16,13 ± 0,25 36,03 ± 0,24 6,68 ± 0,14
ДМСО 5% + аутоплазма 5% 52,27 ± 0,52 12,35 ± 0,30 33,12 ± 0,53 6,89 ± 0,15

Использование вышеуказанных составов с уменьшением содержания ДМСО в криоконсервирующей смеси практически не оказывало влияния на пролиферацию и дифференцировку кроветворных клеток-предшественников ПК. Наблюдалось некоторое снижение уровня колониеобразования в вариантах использования криоконсервирующей смеси с 5% аутологичной плазы преимущественно за счет эритроидного ростка, однако данное изменение не носило характера статистически значимой зависимости.

Полученные результаты позволяют рекомендовать для замораживания и хранения образцов ПК криоконсервирующие составы на основе пониженных концентраций ДМСО (но не менее 5% от конечного объема), дополненные альбумином или аутоплазмой.


Область применения: трансплантация гемопоэтических клеток.
Рекомендации по использованию: способ консервации с использованием криоконсервирующих составов на основе пониженных концентраций ДМСО, дополненных альбумином или аутоплазмой, внедрен в практику в Республиканском центре трансплантации костного мозга и может быть использован для длительн
Предложения по сотрудничеству: совместные исследования по вышеуказанной тематике.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2022 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта