Цель исследования — оценка сохранности гемопоэтических стволовых клеток в образцах пуповинной крови (ПК) при длительном хранении в криобанке при использовании различных криоконсервирующих составов с содержанием диметилсульфоксида (ДМСО) в замораживающей смеси не более 5%.

Про организации банка ПК одним из важнейших вопросов является обеспечение гарантии качества трансплантата при его длительном хранении, что во многом определяется правильным подбором режима замораживания и криопротекторов. Наиболее распространенным является метод с введением ДМСО в концентрации 10% от конечного объема замораживающей смеси. В наших экспериментах этот вариант постановки был использован в качестве контрольного.

Одновремено нами были апробированы криоконсервирующие составы, состоявшие из 5% ДМСО с добавлением 5% альбумина или 5% аутоплазмы (в перерасчете на конечный объем замораживающей смеси).

Для оценки качества образцов в процессе хранения были сформированы 4 серии (3 мес., 6 мес., 9 мес., 1 год). По прошествии вышеозначенных интервалов времени образцы ПК были разморожены. Клетки были исследова­ны на жизнеспособность в стандартном тесте с трипановым синим. Изменение пролиферативного и дифференцировочного потенциала гемопоэтических клеток в процессе хранения оценивалось по их способности к формированию колоний в полутвердых метилцеллюлозных культурах in vitro с использованием тест-системы «Stemline^™ Complete Methylcellulose Medium» (Sigma, США).

При использовании в качестве криопротектора ДМСО в концентрации 10% (контроль) в исследованных сериях не отмечалось снижения жизнеспособности ядросодержащих клеток (ЯСК) в процессе хранения (см. табл. 1).

Таблица 1

Оценка жизнеспособности ЯСК ПК в процессе длительного хранения

При использовании ДМСО в пониженных концентрациях (но не менее 5% от конечного объема) с добавлением альбумина не отмечалось существенного снижения жизнеспособности клеток в процессе хранения, а сохранность клеток была сопоставима с таковой при использовании 10% ДМСО. Введение в криоконсервирующую смесь 5% аутологичной плазмы было несколько менее эффективно, но в целом обеспечивало достаточно высокий уровень сохранности ЯСК (жизнеспособность не ниже 91%) (см. табл. 1).

Что касается пролиферативного и дифференцировочного потенциала гемопоэтических клеток, то в процессе хранения кроветворные предшественники сохраняли нормальный уровень колониеобразования со стандартным для использованной тест-системы распределением по росткам кроветворения (см. табл. 2).

Таблица 2

Пролиферативная активность гемопоэтических клеток ПК в процессе длительного хранения

Использование вышеуказанных составов с уменьшением содержания ДМСО в криоконсервирующей смеси практически не оказывало влияния на пролиферацию и дифференцировку кроветворных клеток-предшественников ПК. Наблюдалось некоторое снижение уровня колониеобразования в вариантах использования криоконсервирующей смеси с 5% аутологичной плазы преимущественно за счет эритроидного ростка, однако данное изменение не носило характера статистически значимой зависимости.

Полученные результаты позволяют рекомендовать для замораживания и хранения образцов ПК криоконсервирующие составы на основе пониженных концентраций ДМСО (но не менее 5% от конечного объема), дополненные альбумином или аутоплазмой.