УДК: 615.012:615.316.018.46
Год издания: 2004

ЭФФЕКТИВНОСТЬ МЕТОДИК СЕПАРАЦИИ ПУПОВИННОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА, ОСНОВАННЫХ НА ИСПОЛЬЗОВАНИИ ОТЕЧЕСТВЕННЫХ ГЕМОКОРРЕКТОРОВ В КАЧЕСТВЕ ГРАДИЕНТОВ

Рябцева Е.С.Кривенко С.И.Гапанович В.Н.Усс А.Л.Завгородняя И.Л.Левин В.И.
Рубрики: 76.29.33
Научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови
Тема НИР: «Разработать стандартные технологические протоколы получения, сепарации, замораживания и хранения в криобанке кроветворных клеток пуповинной крови человека на основе использования отечественных препаратов и материалов с целью создания Национального банка
Сроки выполнения НИР: январь 2002 г. — декабрь 2003 г.
Научный руководитель: канд. мед. наук С.И. Кривенко, д-р мед. наук А.Л. Усс.

Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) является эффективным средством лечения гематологических и онкологических заболеваний.

В современной медицине используются различные источники этих клеток: костный мозг (КМ), перифериче­ская кровь, пуповинная кровь (ПК). Последняя обладает рядом преимуществ, но из-за малого объема образцов и ограниченного количества клеток процесс ее обработки нуждается в оптимизации.

В рамках данной работы была оценена эффективность методик сепарации образцов ПК с использованием градиентов на основе отечественных гемокорректоров «Неорондекс» и «Ладпулин». В контрольных постановках фракционирование проводилось с помощью седиментации 6% раствором гидроксиэтилкрахмала (HES, Fresenius, Германия). В ходе работы было получено и обработано 47 образцов ПК.

Исследованные образцы ПК до фракционирования содержали в среднем (в абсолютных цифрах) 7,8 x 108 ядросодержащих клеток (ЯСК), 2,0 x 108 мононуклеаров (МНК) и 0,16 x 1012 эритроцитов.

После фракционирования в контрольных постановках клеточный состав лейкоконцентрата был следующим: 4,8 x 108 ЯСК, 1,6 x 108 МНК и 0,05 x 1012 эритроцитов. Средний процент выхода ЯСК после сепарации на HES 6% составил 60% при удалении около 65% эритроцитов. Кроме этого при фракционировании данным способом происходило селективное удаление не только эритроцитов, но и гранулоцитов, при меньших потерях МНК, что обеспечивало достоверное повышение относительного содержания фракции МНК в клеточной популяции (с 28,2 ± 2,3 до 37,1 ± 2,4%, p < 0,01).

В экспериментах по оценке пригодности растворов отечественного производства для процессинга трансплантата была изучена возможность применения кровезаменителя «Ладпулин», который представляет собой 6% водный раствор радиационно-химически модифицированного полисахарида (глюкана), синтезируемого дрожжеподобным штаммом Auerobasidium (Pullularia) pullulans, и является ближайшим аналогом HES. Ладпулин обладает стимулирующим действием на гемопоэтические и иммунокомпетентные клетки, что может способствовать более быстрому восстановлению их функций в организме после трансплантации. Для создания градиента из лиофилизированного препарата были приготовлены растворы плотностью 1,077 и 1,065 г/л (последний был исследован в связи с имеющимися данными о повышении содержания кроветворных клеток-предшественников во фракциях, выделяемых на градиентах с плотностью менее 1,070 г/л).

Было установлено, что растворы ладпулина плотностью 1,077 и 1,065 г/л не пригодны для седиментации ПК, т.к. на данных градиентах не происходило разделения ПК ни при пассивной седиментации в течение 3 ч, ни при центрифугировании при 400 g в течение 30 мин.

Учитывая, что кровезаменитель «Неорондекс» ранее уже был использован нами для процессинга трансплантата костного мозга, и выход ЯСК при его применении для фракционирования сравним с аналогичным показателем для 6% НЕS, в данной работе были проведены исследования по выделению ЯСК из ПК на сложных градиентах, приготовленных на основе неорондекса и ладпулина.Были использованы 7 вариантов градиентов, содержащих неорондекс и ладпулин в различных процентных соотношениях (от 10 до 90% последнего по отношению к общему объему градиента).

Существенных различий по выходу ЯСК на единицу объема после фракционирования при использовании смешанных градиентов выявлено не было, за исключением варианта, содержавшего 90% ладпулина. Однако при анализе количества крови, собираемой после седиментации, было установлено, что присутствие в смеси ладпулина в объеме более 40% от общего объема градиента уменьшает объем образца более чем в два раза. При этом существенно ухудшается качество разделения клеток и возрастает примесь эритроцитов.

Таким образом, на основании проведенных исследований можно заключить, что для фракционирования ПК можно предложить седиментирующий состав на основе отечественных гемокорректоров «Неорондекс» и «Ладпулин», содержащий не более 40% последнего препарата.


Область применения: трансплантация гемопоэтических клеток.
Рекомендации по использованию: способ фракционирования пуповинной крови с применением седиментирующего состава на основе отечественных гемокорректоров «Неорондекс» и «Ладпулин» внедрен в практику в Республиканском центре трансплантации костного мозга и может быть использован для сепара
Предложения по сотрудничеству: совместные исследования по вышеуказанной тематике.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2022 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта