Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) является эффективным средством лечения гематологических и онкологических заболеваний.

В современной медицине используются различные источники этих клеток: костный мозг (КМ), перифериче­ская кровь, пуповинная кровь (ПК). Последняя обладает рядом преимуществ, но из-за малого объема образцов и ограниченного количества клеток процесс ее обработки нуждается в оптимизации.

В рамках данной работы была оценена эффективность методик сепарации образцов ПК с использованием градиентов на основе отечественных гемокорректоров «Неорондекс» и «Ладпулин». В контрольных постановках фракционирование проводилось с помощью седиментации 6% раствором гидроксиэтилкрахмала (HES, Fresenius, Германия). В ходе работы было получено и обработано 47 образцов ПК.

Исследованные образцы ПК до фракционирования содержали в среднем (в абсолютных цифрах) 7,8 x 10⁸ ядросодержащих клеток (ЯСК), 2,0 x 10⁸ мононуклеаров (МНК) и 0,16 x 10¹² эритроцитов.

После фракционирования в контрольных постановках клеточный состав лейкоконцентрата был следующим: 4,8 x 10⁸ ЯСК, 1,6 x 10⁸ МНК и 0,05 x 10¹² эритроцитов. Средний процент выхода ЯСК после сепарации на HES 6% составил 60% при удалении около 65% эритроцитов. Кроме этого при фракционировании данным способом происходило селективное удаление не только эритроцитов, но и гранулоцитов, при меньших потерях МНК, что обеспечивало достоверное повышение относительного содержания фракции МНК в клеточной популяции (с 28,2 ± 2,3 до 37,1 ± 2,4%, p < 0,01).

В экспериментах по оценке пригодности растворов отечественного производства для процессинга трансплантата была изучена возможность применения кровезаменителя «Ладпулин», который представляет собой 6% водный раствор радиационно-химически модифицированного полисахарида (глюкана), синтезируемого дрожжеподобным штаммом Auerobasidium (Pullularia) pullulans, и является ближайшим аналогом HES. Ладпулин обладает стимулирующим действием на гемопоэтические и иммунокомпетентные клетки, что может способствовать более быстрому восстановлению их функций в организме после трансплантации. Для создания градиента из лиофилизированного препарата были приготовлены растворы плотностью 1,077 и 1,065 г/л (последний был исследован в связи с имеющимися данными о повышении содержания кроветворных клеток-предшественников во фракциях, выделяемых на градиентах с плотностью менее 1,070 г/л).

Было установлено, что растворы ладпулина плотностью 1,077 и 1,065 г/л не пригодны для седиментации ПК, т.к. на данных градиентах не происходило разделения ПК ни при пассивной седиментации в течение 3 ч, ни при центрифугировании при 400 g в течение 30 мин.

Учитывая, что кровезаменитель «Неорондекс» ранее уже был использован нами для процессинга трансплантата костного мозга, и выход ЯСК при его применении для фракционирования сравним с аналогичным показателем для 6% НЕS, в данной работе были проведены исследования по выделению ЯСК из ПК на сложных градиентах, приготовленных на основе неорондекса и ладпулина.Были использованы 7 вариантов градиентов, содержащих неорондекс и ладпулин в различных процентных соотношениях (от 10 до 90% последнего по отношению к общему объему градиента).

Существенных различий по выходу ЯСК на единицу объема после фракционирования при использовании смешанных градиентов выявлено не было, за исключением варианта, содержавшего 90% ладпулина. Однако при анализе количества крови, собираемой после седиментации, было установлено, что присутствие в смеси ладпулина в объеме более 40% от общего объема градиента уменьшает объем образца более чем в два раза. При этом существенно ухудшается качество разделения клеток и возрастает примесь эритроцитов.

Таким образом, на основании проведенных исследований можно заключить, что для фракционирования ПК можно предложить седиментирующий состав на основе отечественных гемокорректоров «Неорондекс» и «Ладпулин», содержащий не более 40% последнего препарата.