Производные алкалоида барвинка розового винкристин (винбластин) широко используются в терапии различных типов лейкемий и лимфом, а также других опухолевых процессов (рак яичка, почки, мочевого пузыря, молочной железы, шейки матки, легкого и др.; саркомы Капоши, Юинга, мягких тканей, остеогенной и др.). Несмотря на высокую противоопухолевую активность указанных препаратов, снижение чувствительности опухолевых клеток к ним в процессе лечения вносит существенный вклад в формирование фенотипа множественной лекарственной резистентности. В связи с этим предлагается новая модель для изучения процессов возникновения нечувствительности к лекарственной терапии и способов ее преодоления при опухолевых заболеваниях.

Путем длительного (в течение почти 6 месяцев) культивирования клеток стандартной лимфобластоидной линии IM-9 в среде RPMI 1640 с 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 2 мкМ L-глютамина с периодической заменой питательной среды (каждые 3-4 дня) и возрастающими концентрациями винкристина (от 2 до 15 нМ) установлена сублиния IM-9/Vcr, резистентная к индуцирующему агенту, клетки которой, по данным теста с метилтиазолтетразолием (MTT-тест), сохраняли 50%-ную жизнеспособность при концентрации препарата (LC50) в среде, превышающую более чем в 3 раза таковую, приводящую к 50%-ному подавлению выживаемости клеток исходной родительской линии (LC50 соответственно составляла 25,5±2,1 нМ и 8,21,5 нМ).

Более того, клетки полученной нами новой винкристин-резистентной сублинии характеризовались признаками множественной лекарственной резистентности, что соответствует ситуации, наблюдаемой в клинике. Так, у клеток этой сублинии чувствительность к цитостатическим препаратам с другим механизмом действия, а именно к иринотекану, этопозиду, доксорубицину и таксотеру снизилась соответственно в 1,7, 2,0, 2,9 и 3,1 раза по сравнению с чувствительностью клеток исходной родительской линии.

Приобретение клетками новой сублинии фенотипа множественной лекарственной резистентности подтверждено выявленной с помощью моноклональных антител повышенной экспрессией на их поверхности Р-гликопротеина, ответственного за выведение ксенобиотиков из клеток (32% клеток, интенсивность флуоресценции 27,1 усл.ед), по сравнению с клетками линии IM-9 (1,8% клеток, интенсивность флуоресценции 5,3 усл.ед.). С помощью теста остаточного удержания в клетках флуоресцентного красителя – родамина 123 установлено, что функциональная активность системы транспортных белков в клетках полученной сублинии повысилась в 35,7 раза.

Клеточная сублиния IM-9/Vcr поддерживается в культуре, имеет стабильные свойства и хранится при температуре жидкого азота.