Цель исследования – создание метода определения растворимой формы рецептора ИЛ-8 CXCR2.

Интерлейкин-8 (ИЛ-8) служит основным хемотактическим фактором для нейтрофильных лейкоцитов при воспалении. Свое действие ИЛ-8 осуществляет за счет связывания с двумя рецепторами, CXCR1 и CXCR2. Ранее нами было показано подавление экспрессии CXCR1 и CXCR2 на нейтрофилах под действием S.aureus и фагоцитарных стимулов за счет протеолиза мембранными металлопротеазами. Мы предположили, что возможно появление растворимых рецепторов ИЛ-8, которые могут послужить объектом для диагностики состояния потери рецепторов ИЛ-8 нейтрофилами. В связи с большей чувствительностью CXCR2 к регуляторным воздействиям, была изучена возможность появления растворимой формы CXCR2 в культуре нейтрофилов. С помощью пептидов, идентичных N-концевой последовательности экстраклеточного фрагмента CXCR2, из 43 (NTP1) и 21 аминокислот (NTP2), были исследованы имеющиеся моноклональные антитела против CXCR2. Установлено, что все моноклональные антитела распознают один доминантный эпитоп в области 6-10 N-концевых аминокислот CXCR2, включающих пентапептид FEDFW. В связи с этим далее был использован принцип конкурентного сатурационного иммуноферментного анализа (ИФА), в котором меченным лигандом служил пептид NTP2, конъюгированный с биотином. Было найдено моноклональное антитело, которое после сорбции на твердой фазе эффективно связывало биотинилированный NTP2. Добавление в такую ИФА немеченого NTP2 приводило к подавлению связывания меченого пептида. В результате был впервые создан вариант конкурентного сатурационного ИФА, который позволяет количественно определять растворимый NTP2, имеет рабочий диапазон калибровочной кривой 1-40 нг/мл и чувствительность 1 нг/мл. Использование современных усовершенствованных хромогенных субстратов для ИФА позволяет существенно повысить чувствительность тест-системы. С помощью созданного ИФА в культуральной среде нейтрофильных лейкоцитов, активированных фактором некроза опухоли-, был впервые выявлен растворимый антиген, эффективно конкурировавший с меченным NTP2, что подтверждает гипотезу о существовании растворимой формы рецептора ИЛ-8 CXCR2 и позволяет перейти к его выделению и определению структуры и свойств.