УДК: 618.34-022.7
Год издания: 2005

ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЕ ВЫДЕЛЕНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ G ДЛЯ ИСПОЛЬ-ЗОВАНИЯ В СОЗДАНИИ АНТИТЕЛЬНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ИДЕНТИФИ-КАЦИИ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ

Титов Л.П.Ермакова Т.С.Паньшина Е.Ф.Гомолко Н.Н.
Рубрики: 76.03.4376.35.33
Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: Разработать технологию получения корпускулярных диагностикумов для ускоренной серодиагностики бактерий кишечной группы
Сроки выполнения НИР: 2001-2005 гг.
Научный руководитель: член-корр.НАНБ, д.м.н., профессор Л.П. Титов
Соисполнители: ГУ НИИ эпидемиологии и микробиологии
Источник финансирования: госбюджет

Этиология острых кишечных инфекций не менее чем в 25% случаев остается не ус-тановленной. Это диктует необходимость постоянного контроля ситуации, для чего тре-буются надежные, эффективные методы детекции патогенов. Серологический метод идентификации энтеробактерий приобрел в микробиологии большое значение, как метод не только точной типизации, но и классификации многочисленных представителей этого семейства бактерий.

Нами разработаны и апробированы в лабораторных условиях диагностикумы для иммуноанализа, основанного на использовании специфических иммуноглобулинов G, ме-ченных частицами коллоидного золота.

Источниками иммуноглобулинов G служили коммерческие препараты производст-венных серий сывороток крови кроликов к сальмонеллам и шигеллам.

Разделение иммуноглобулинов осуществляли на колонке с мелкозернистым (1 мкм) сферогелем TSK 3000, оснащенной предколонкой с такой же фазой 73,5 х 75 мм ме-тодом эксклюзивной хроматографии. Использовали высокоэффективный жидкостной хроматограф системы “Gold” фирмы Beckman. Фактор разделения для данных соединений (а) составил 1,6, а фактор разрешения (R s) системы составил 3,2. Разделение иммуногло-булинов в подобранных условиях происходит с достаточным разрешением (более 1), что позволяет получать чистый (до 98%) и сохраняющий свою биологическую активность препарат.

Этим методом были получены иммуноглобулины G из сальмонеллезной О-сыворотки кроличьей группы A, B, C, D, E, сальмонеллезной О-сыворотки рецептор vi, сыворотки к Shigella boydii, Shigella dysenteriae 1, 2, Shigella flexneri I-VI, Shigella sonnei. Дальнейшее концентрирование белков проводили с помощью сефадекса Г- 25. Молеку-лярная масса белков 67 кДа.

На основе полученных очищенных иммуноглобулинов были произведены образцы диагностикума твердофазного для серотипирования бактерий кишечной группы. Основой твердофазного диагностикума являются полоски нитроцеллюлозной мембраны с нанесен-ными на них конъюгатами коллоидного золота с иммуноглобулинами G. Гомологичные иммуноглобулины G при взаимодействии с антигенами, содержащимися в микробной клетке бактерий, вступают в реакцию агглютинации. При этом на полоске появятся чет-кие, окрашенные в розовый цвет, пятна, представляющие собой комплекс антитело-коллоидное золото-антиген. В отрицательном случае окрашивание развиваться не должно. Показатель видовой специфичности диагностикума не ниже 97%. При проведении имму-ноанализа с гетерологичными антигенами бактерий, а также со стерильным физиологиче-ским раствором через 40-120 минут перекрестных реакций не обнаружено, внешний вид и окраска полосок из нитроцеллюлозы не изменяются.

Таким образом, разработаны диагностикумы, эффективные для обнаружения анти-генов энтеробактерий, отличающиеся высокой чувствительностью и информативностью, которые могут использоваться для ускоренного скрининга клинического материала в ус-ловиях практических лабораторий.



в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2019 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта