УДК: 6/6.36-002.14;578.891-092
Год издания: 2005

РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ И НАБОРА ПЦР С ИММУНОЛОГИЧЕ-СКИМ КОМПОНЕНТОМ, СТАНДАРТА РНК ВИРУСА ГЕПАТИТА А

Плотникова К.Ю.Виринская А.С.Гудков В.Г.
Рубрики: 76.35.33
Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: Разработать технологию и организовать производство препаратов для ПЦР-диагностики вирусного гепатита А
Сроки выполнения НИР: 2001г. – декабрь 2005г.
Научный руководитель: В.Г. Гудков
Соисполнители: Государственное учреждение научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии МЗ РБ
Источник финансирования: госбюджет

Вирусный гепатит А (ГА) широко распространен во всем мире, он представляет серьезную социально-экономическую проблему и для Респуб-лики Беларусь. В последние годы наиболее эффективным методом обнару-жения вируса гепатита А (ВГА) в объектах внешней среды в рамках эпиде-миологического надзора за инфекцией считается полимеразная цепная реак-ция (ПЦР).

Важным этапом ПЦР-диагностики ГА является выделение РНК вируса. Однако при исследовании фекалий, сточных вод, некоторых других объектов внешней среды конечные результаты реакции зависят от содержания в них бактериальной флоры, билирубина, желчных кислот, мочевины, гепарина, следов фенола, полисахаридов, поверхностно активных и других веществ, ингибирующих ПЦР. Существующие коммерческие наборы не обеспечивают решения этой проблемы, кроме того, оценка эффективности исследований затруднена из-за отсутствия стандартов РНК ВГА, проходящих через все стадии исследования.

Целью настоящего проекта являлась разработка методики реакции и технологии изготовления наборов для ПЦР-диагностики ГА, а также стан-дарта РНК этого возбудителя. В основе методики лежит антиген-связывающая ПЦР (АС-ПЦР), позво-ляющая селективно амплифицировать антиген-ассоциированную вирусную РНК. Выделение РНК ВГА осуществляется после связывания вируса сорби-рованными на твердой фазе специфическими антителами к нему. Сорбция антител проводится на стандартизованных планшетах для иммунологических реакций с использованием приемов, реагентов и оборудования для иммуно-ферментного анализа. Последующий цикл отмывки позволяет удалить инги-биторы реакции и упростить методику выделения РНК.

Набор включает 4 комплекта материалов и реагентов, предназначенных для проведения всех стадий исследования: выделения из исследуемых проб вирусной РНК, проведения обратной транскрипции, амплификации и элек-трофореза для детекции специфического ПЦР-продукта амплификации. По-ложительные контроли представлены двумя реагентами: сорбированным в лунках планшета ВГА (стандарт РНК ВГА), проходящим все стадии иссле-дования, включая выделение РНК, а также кДНК, в качестве контроля ста-дии амплификации.

Разработанный набор АС-ПЦР для выявления ВГА существенно отлича-ется от аналогов использованием иммунологического компонента. С одной стороны это снимает проблему ингибирования реакции, повышая ее специ-фичность и чувствительность при исследовании т.н. сложных проб, с другой, обеспечивает индикацию вируса сразу по двум маркерам (антигену и гено-му), что позволяет классифицировать обнаруженный вирус как инфекцион-ный.


Область применения: эпидемиологический надзор
Рекомендации по использованию: поставка набора АС-ПЦР ВГА и стандарта РНК ВГА


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2019 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта