Вирусный гепатит А (ГА) широко распространен во всем мире, он представляет серьезную социально-экономическую проблему и для Респуб-лики Беларусь. В последние годы наиболее эффективным методом обнару-жения вируса гепатита А (ВГА) в объектах внешней среды в рамках эпиде-миологического надзора за инфекцией считается полимеразная цепная реак-ция (ПЦР).

Важным этапом ПЦР-диагностики ГА является выделение РНК вируса. Однако при исследовании фекалий, сточных вод, некоторых других объектов внешней среды конечные результаты реакции зависят от содержания в них бактериальной флоры, билирубина, желчных кислот, мочевины, гепарина, следов фенола, полисахаридов, поверхностно активных и других веществ, ингибирующих ПЦР. Существующие коммерческие наборы не обеспечивают решения этой проблемы, кроме того, оценка эффективности исследований затруднена из-за отсутствия стандартов РНК ВГА, проходящих через все стадии исследования.

Целью настоящего проекта являлась разработка методики реакции и технологии изготовления наборов для ПЦР-диагностики ГА, а также стан-дарта РНК этого возбудителя. В основе методики лежит антиген-связывающая ПЦР (АС-ПЦР), позво-ляющая селективно амплифицировать антиген-ассоциированную вирусную РНК. Выделение РНК ВГА осуществляется после связывания вируса сорби-рованными на твердой фазе специфическими антителами к нему. Сорбция антител проводится на стандартизованных планшетах для иммунологических реакций с использованием приемов, реагентов и оборудования для иммуно-ферментного анализа. Последующий цикл отмывки позволяет удалить инги-биторы реакции и упростить методику выделения РНК.

Набор включает 4 комплекта материалов и реагентов, предназначенных для проведения всех стадий исследования: выделения из исследуемых проб вирусной РНК, проведения обратной транскрипции, амплификации и элек-трофореза для детекции специфического ПЦР-продукта амплификации. По-ложительные контроли представлены двумя реагентами: сорбированным в лунках планшета ВГА (стандарт РНК ВГА), проходящим все стадии иссле-дования, включая выделение РНК, а также кДНК, в качестве контроля ста-дии амплификации.

Разработанный набор АС-ПЦР для выявления ВГА существенно отлича-ется от аналогов использованием иммунологического компонента. С одной стороны это снимает проблему ингибирования реакции, повышая ее специ-фичность и чувствительность при исследовании т.н. сложных проб, с другой, обеспечивает индикацию вируса сразу по двум маркерам (антигену и гено-му), что позволяет классифицировать обнаруженный вирус как инфекцион-ный.