УДК: 599.32:615.153.922.4:[616.986.7^616.15
Год издания: 2005

РАЗРАБОТКА ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ КЛАССА G К ВОЗБУДИТЕЛЮ ЛЕПТОСПИРОЗА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ МЫШЕВИДНЫХ ГРЫЗУНОВ В НЕПРЯМОЙ РЕАКЦИИ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНЦИИ

Капитулец С.П.Капитулец Н.Н.Петкевич А.С.
Рубрики: 76.03.4576.03.55
Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: Провести этиологический и клинико-эпидемиологический мониторинг возбудителей природно-очаговых инфекций, создать основу разработки новых способов лечения заболеваний, вызываемых спирохетами и коронавирусами
Сроки выполнения НИР: январь 2004 г. - декабрь 2005 г.
Научный руководитель: к.м.н. А.С.Петкевич
Соисполнители: Государственное учреждение «Научно-исследователь-ский институт эпидемиологии и микробиологии»
Источник финансирования: госбюджет

Циркуляция лептоспир в окружающей среде определяется нетрансмиссивным меха-низмом передачи. Основным источником и резервуаром инфекции в природных очагах леп-тоспироза являются мелкие мышевидные грызуны, эпизоотический процесс у которых про-текает чаще в бессимптомной форме и сопровождается пожизненной лептоспирурией, реже в манифестной форме. В условиях городов мощным резервуаром являются синантропные грызуны, причем зараженность их популяций может колебаться от нескольких процентов до 50–60 и выше.

Исследования были направлены на разработку отечественной иммунофлюоресцентной тест-системы для выявления иммуноглобулинов класса G к возбудителю лептоспироза в сы-воротке крови мелких мышевидных грызунов.

Основой разработанной тест~системы является комплексный антиген L.interrogans, обладающий широким диапазоном внутриродовых и внутригрупповых антигенных связей. Антиген представлен культурой лептоспир 7 серогрупп, циркулирующих в республике, им-мобилизованной на поверхности лунок предметных стекол, предназначенных для реакции иммунофлюоресценции (РИФ). В качестве положительной контрольной сыворотки (K+) со-держащей poдo- и группоспецифические противолептоспирозные антитела, в тест-системе используется полирецепторная сыворотка, полученная путем объединения трех моносыворо-ток мышей, иммунизированных культурами лептоспир серогрупп Grippotyphosa, Hebdomadis и Icterohaemorragiae, с титром антител не ниже 1: 400. Комплекс антиген-антитело выявляют с помощью антивидовой сыворотки, меченной флюоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ), со-держащей антитела класса IgG против иммуноглобулинов мыши (F2012, Sigma, США), даю-щей при просмотре в люминесцентном микроскопе четко выраженное изумрудно-зеленое свечение большинства лептоспир. Слабое зеленоватое, желтоватое или красноватое свечение антигена, а также отсутствие люминесценции оценивают как отрицательный результат.

Дополнительно, тест-система позволяет выявлять животных-лептоспироносителей, длительно выделяющих с мочой живой возбудитель. Для этого в лунки «чистого» стеклышка, прилагаемого к тест-системе, наносят каплю мочи животного или готовят мазок-отпечаток коркового слоя почек, высушивают на воздухе, фиксируют в ацетоне и проводят РИФ в соот-ветствии со стандартной методикой. Оценку результатов исследования проб проводят на ос-новании яркости флюоресценции контрольной положительной пробы и выявления в иссле-дуемом материале микроорганизмов с характерной морфологией лептоспир. Специфическая зеленая флюоресценция в отрицательной пробе должна отсутствовать.

Диагностические показатели тест-системы были испытаны при исследовании 42 сыво-роток крови мышей с экспериментальной лептоспирозной инфекцией и 83 сывороток мелких мышевидных грызунов, полученных из лаборатории особо опасных инфекций Минского об-ластного центра гигиены и эпидемиологии. Полученные результаты были сравнимы с дан-ными, полученными при анализе этих сывороток в реакции микроагглютинации на стекле с 7 серогруппами живых культур диагностических штаммов лептоспир, обладающих широким диапазоном внутригрупповых антигенных связей («золотой стандарт»). На диагностическую тест-систему разработана НТД на производство. Аналогичные диагностикумы в республике и за рубежом не выпускаются.


Область применения: эпидемиология и лабораторная диагностика
Рекомендации по использованию: для выявления лептоспирозной инфекции и лептоспироносительства у мелких мышевидных грызунов при эпизоотологическом обследовании в природных и антропургических очагах инфекции
Предложения по сотрудничеству: изготовление по заказам малых партий продукции для проверки эффективности тест-системы с привлечением Республиканского и областных центров гигиены, эпидемиологии и общественного здоровья МЗ РБ


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2019 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта