Быстрая диагностика клещевого энцефалита (КЭ) особенно актуальна в связи с тем, что это заболевание, как и другие арбовирусные инфекции проходит под другими диагнозами или не диагностируются.

Нами разработана тест-система для определения антител класса М и G к вирусу клещевого энцефалита непрямым методом флуоресцирующих антител (нМФА) в сыворотках крови больных людей. Основой тест-системы является антиген, содержащийся в фиксированных клетках перевиваемой культуры BGM, зараженной вирусом КЭ, содержащейся в лунках предметных стекол. Основным свойством тест-системы является способность выявлять антитела класса М и G в сыворотках крови больных за счет свойств антигена специфически связываться с гомологичными антителами. Выявление связавшихся с антигенами антител проводится с помощью антивидовой сыворотки, меченой флуоресцеинизотиоционатом (ФИТЦ) (иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих) и содержащей антитела к иммуноглобулинам М и G (Ig M и G) человека. Учет реакции проводят с помощью люминесцентного микроскопа.

Тест-система выпускается в комплекте с реагентами, необходимыми для постановки нМФА и соответствующими положительными и отрицательными контролями. Препарат с антигенсодержащими клетками представляет собой предметное стекло, содержащее 8 лунок с зараженными клетками. В качестве положительного контроля используется иммунная асцитическая жидкость (ИАЖ), содержащая антитела (IgM и IgG) к вирусу КЭ, которая получена путем иммунизации белых мышей вируссодержащей суспензией. Отрицательным контролем служит асцитическая жидкость (АЖ), не содержащая антител к вирусам. Так же в комплект входят иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие против IgM и IgG белых мышей и иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие против IgM и IgG человека, которые представляют собой антитела, меченные ФИТЦ (коммерческие препараты НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, г. Москва).

На первом этапе работы проводили восстановление штамма вируса КЭ. Для этого готовили 10%-ую вируссодержащую суспензию из мозга и заражали ею белых мышей. На высоте проявления клинических признаков заболевания животных усыпляли эфиром, извлекали мозг и готовили вируссодержащую суспензию на среде ДМЕМ, которую использовали для инфицирования клеток BGM. Инкубировали 5-6 суток при температуре +37оС. Микроскопировали ежедневно.

Для получения антигенсодержащих препаратов инфицировали монослой 2-х суточной культуры клеток BGM и инкубировали при температуре +37оС. После максимального накопления в клетках вирусспецифических белков, контролируемых нМФА (72-96 часов) монослой клеток переводили в суспензию и доводили их концентрацию до 2 млн./мл. Полученную суспензию инфицированных клеток наносили в лунки предметных стекол, фиксировали ледяным ацетоном и обеззараживали под ультрафиолетовыми лампами.

ИАЖ, содержащую IgM и IgG к вирусу КЭ, получали путем иммунизации белых мышей вируссодержащей суспензией по разработанной нами схеме иммунизации. При накоплении достаточного количества асцитической жидкости производили ее забор, путем пункции брюшной полости белых мышей. Для получения АЖ, не содержащей антител к вирусам, иммунизацию осуществляли нормальной мозговой суспензией, приготовленной из мозга здоровых белых мышей. Качество и специфичность ИАЖ контролировали в РСК.

Разработанная нами тест-система для экспресс-диагностики КЭ позволяет диагностировать заболевание в короткие сроки и ускорить постановку этиологического диагноза, учитывая многообразие симптомов проявления арбовирусных инфекций.