|
УДК: 616.6-022:577.213.3]-074/.078
Год издания: 2006
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПАТОЛОГИЧЕСКИ ЗНАЧИМОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ ДНК MYCOPLASMA HOMINIS И UREAPLASMA UREALYTICUM В РАСТВОРЕ СУММАРНОЙ ДНК И В РАСЧЕТЕ НА ОДНУ ЭПИТЕЛИАЛЬНУЮ КЛЕТКУ МЕТОДОМ ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ
Хулуп Г.Я., Костюк С.А., Бадыгина Н.А.
Рубрики: 76.35.33
Белорусская медицинская академия последипломного образования
Тема НИР: Изучение видовой специфичности и устойчивости к антибиотикам инфекций родовых путей с помощью ПЦР-диагностики для разработки рекомендаций по профилактике осложнений беременности
Сроки выполнения НИР: 2003–2005 гг
Научный руководитель: д-р мед. наук, проф. Г.Я. Хулуп
Источник финансирования: государственный бюджет Республики Беларусь
Цель работы – определение патологически значимой концентрации ДНК Mycoplasma hominis (M.h.) и Ureaplasma urealyticum (Ur. Ur.) в растворе суммарной ДНК и в расчете на одну эпителиальную клетку, используя метод ПЦР в реальном времени.
При количественном определении относительной концентрации ДНК Ur.ur. и/или M.h. определена патологически значимая концентрация возбудителей в урогенитальном тракте: для Ur. ur. - >105 копий ДНК гена ureB в 1 мл раствора суммарной ДНК или >0,3 клеток уреаплазм, приходящихся на 1 эпителиальную клетку; M. h. - >105 копий ДНК гена 16SРНК в 1 мл раствора суммарной ДНК или >0,2 клеток микоплазм в расчете на 1 эпителиальную клетку.
Стандартизация исследования проводилась относительно однокопийного гена человека NAGK, который локализован на участке р13.3 короткого плеча хромосомы 2. Математический расчет концентрации ДНК однокопийного гена NAGK (гаплоид) показал, что 1 мкг/мл человеческой ДНК содержит 5,5x105 копий/мл ДНК гена NAGK. Таким образом, ДНК человека в концентрации 1 мкг/мл содержит 2,75x105 эпителиальных клеток.
Результаты ПЦР в реальном времени по определению патологически значимой концентрации ДНК Ur. ur., M.h. были сопоставлены с результатами бактериологического обследования этих же пациентов (n=50). Установлен высокий % совпадения результатов ПЦР и бактериологического методов диагностики - 85,7% для Ur. ur., 80% для M.h.
Использование данной методики позволяет не только определять коли-чество инфекционной ДНК Ur.ur. и/или M.h. в растворе суммарной ДНК, но и стандартизирует получаемый для исследования биологический материал в расчете на число эпителиальных клеток, что облегчает клиническую интерпретацию результатов. Значения патологически значимых концентраций ДНК условно-патогенных возбудителей - Ur.ur. и/или M.h. позволяет оценить клинический прогноз течения заболевания, вести оперативный мониторинг эффективности проводимой терапии.
Получены уведомления о положительном результате предварительной экспертизы заявок о выдаче патентов РБ на изобретения: 1. «Способ определения концентрации ДНК Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum в эпителиальных клетках» от 18.05.2005 г. № 20050482; 2. «Способ создания калибратора ДНК Ureaplasma urealyticum или Mycoplasma hominis» от 16.05.06 г. № 20060463.
Область применения: гинекология, урология, венерология.
Результаты внедрены в практическое здравоохранение в ЛПУ г. Мин-ска и Минской области: ГУ «МРТМО», ГУ РНПЦ «Мать и дитя», УЗ «Родильный дом Минской области» в форме актов о внедрении
Предложения по сотрудничеству: будем благодарны за участие во внедрении в Городском клиническом кожно-венерологическом диспансере, Минском областном кожно-венерологическом диспансере, Минском консультативно-диагностическом центре