УДК: УДК 616.24-002:616.24]-053.2/.6-074/.078
Год издания: 2006

МУЛЬТИПЛЕКСНАЯ ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ TAQMAN МЕТОДИКИ ДЛЯ ОДНОВРЕМЕННОЙ ДЕТЕКЦИИ СHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE И MYCOPLASMA PNEUMONIAE В МОКРОТЕ ДЕТЕЙ И ПОДРОСТКОВ С ДВУСТОРОННЕЙ ИНТЕРСТИЦИАЛЬНОЙ ПНЕВМОНИЕЙ

Хулуп Г.Я.Силич Т.В.Костюк С.А.Василевский И.В.Полуян О.С.
Рубрики: 76.29.0076.35.33
Белорусская медицинская академия последипломного образования
Тема НИР: Разработать и внедрить в клиническую практику систему молекулярно-генетической диагностики хламидийно-микоплазменных инфекций верхних дыхательных путей и пневмоний у детей и подростков
Сроки выполнения НИР: 2005–2007 гг.
Научный руководитель: д-р мед. наук, проф. Г.Я. Хулуп.
Соисполнители: Белорусский государственный медицинский университет
Источник финансирования: государственный бюджет Республики Беларусь

Цель работы – оптимизация полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени для одновременной детекции возбудителей хламидиально-микоплазменной природы в мокроте пациентов с двухсторонней интерстициальной пневмонией.

В ходе работы были синтезированы видоспецифичные праймеры: праймеры для детекции Сhlamydophila pneumoniae Chl.pn.1 - 5| CATGGTGTCATTCGCCAAGT 3|, Chl.pn.2 - 5| CGTGTCGTCCAGCCATTTTA 3|; олигонуклеотидная меченая проба 5| FAM TCTACGTTGCCTCTAAGAGAAAACTTCAAGTTGGA TAMRA 3|; праймеры для детекции Mycoplasma pneumoniae М.pn.1 - 5| CCAACCAAACAACAACGTTCA 3|; М.pn.2 - 5| ACCTTGACTGGAGGCCGTTA 3|, олигонуклеотидная меченая проба 5| FAM TCAATCCGAATAACGGTGACTTCTTACCACTG TAMRA 3|.

Исходные значения температурных режимов амплификации были определены экспериментально:

1. Денатурация ДНК (расплетение двойной спирали)
+950С…5 мин.

2. Отжиг (присоединение праймеров)
+500С…2 мин.
+950С…10 мин.

3. Элонгация (достраивание цепей ДНК)
+950С…15 сек. – 50 циклов
+600С…1 мин.

Оптимизированная мультиплексная количественная реал-тайм ПЦР для одновременной детекции Mycoplasma pneumoniae и Сhlamydophila pneumoniae в мокроте детей и подростков с двусторонней интерстициальной пневмонией является лучшей альтернативой традиционной ПЦР в целях клинической диагностики, т.к. результаты доступны в течение 4-5 часов в высоко стандартизированном формате без обработки ПЦР продуктов, что снижает риск ложноположительных результатов, которые могут иметь место при манипуляциях с ампликонами. Данная методика дает возможности детектировать несколько патогенов одновременно, что чрезвычайно экономично для образцов малого количества. Другое преимущество технологии состоит в возможности количественного учета амплифицированного продукта, что дает возможность выявлять различия в инфекционной нагрузке между асимптоматичными носителями.

По результатам исследования подана заявка на патент: Способ определения концентрации ДНК Chlamydophila pneumoniae и Mycoplasma pneumoniae в биологическом материале.


Область применения: лабораторная диагностика, оториноларингология, пульмонология. Результаты работы внедрены в практику: ЛПУ «Городская детская клиническая больница» № 3 г. Минска государственного учреждения «Республиканская клиническая больница патологии слуха, голоса и реч
Предложения по сотрудничеству: проведение дальнейших совместных исследований по заявленной тематике НИР с целью улучшения качества подбора соответствующего лечения в максимально быстрые сроки, а также мониторинга течения заболевания и контроля излеченности


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2019 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта