К наиболее тяжелым формам мужского бесплодия относятся азооспермия и врожденное двустороннее отсутствие семявыводящих протоков (ВДОСП). Такого рода патология наблюдается у 4-5% пациентов с нарушением репродуктивной функции. Еще в 70-х годах XX века было высказано предположение, что у некоторых мужчин она может быть ассоциирована с очень «мягкой» формой муковисцидоза (МВ), вызванного дефектами гена трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза (ТРБМ).

Причиной развития ВДОСП-фенотипа могут быть не только мутации гена ТРБМ, но и наличие определенного аллельного варианта политимидинового тракта интрона 8 данного гена. Этот полиморфизм может содержать 5, 7 или 9 тимидиновых оснований (аллели 5Т, 7Т, 9Т). Обнаружено, что в мРНК, имеющей аллель 5Т, возникает альтернативный сайт сплайсинга, ведущий к появлению аномальных транскриптов гена ТРБМ, не имеющих 9-го экзона. В результате продукция нормального белка может составлять менее 10%.

Так как двустороннее отсутствие семявыводящих протоков приводит к полному отсутствию сперматозоидов в эякуляте, пациенты с такой формой бесплодия, вероятно, могут быть выявлены среди тех, кому поставлен диагноз азооспермия. Таким образом, исследование аллельных вариантов политимидинового тракта интрона 8 гена ТРБМ у пациентов с азооспермией может быть не только оценкой вклада генетических факторов в нарушение репродуктивной функции у мужчин, но и являться основанием для дальнейшего обследования с целью выявления ВДОСП.

Для точного гаплотипирования образцов ДНК по аллелям полиморфизма интрона 8, различающихся по длине на 2 нуклеотида, анализ выполняли с помощью автоматического капиллярного электрофореза после амплификации специфических ДНК последовательностей гена с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Анализ полиморфизма политимидинового тракта интрона 8 проводили в образцах ДНК от лиц с азооспермией и в контрольной группе. Всего распределение аллелей исследовано в 102 хромосомах от пациентов и 240 нормальных хромосомах.

Показано, что в контрольной группе 7Т–аллель является мажорным и встречается с частотой 84,9%, аллель 9Т – 10,2%, аллель 5T – 4,8%. Гетерозиготность полиморфизма в популяции Беларуси, рассчитанная по формуле H=1-Σq2, составила 33,8%. Полученные нами результаты хорошо согласуются с имеющимися данными для других европейских популяций.

Частота аллеля 5T, вызывающего появление аномальных транскриптов гена ТРБМ и снижающего продукцию нормального белка, в группе пациентов оказалась в три раза выше, чем в контрольной группе. Кроме того, у двух пациентов с азооспермией было установлено гомозиготное носительство аллеля 5T. Это является важным диагностическим признаком того, что причиной патологии у них может быть отсутствие семявыносящих протоков.

Таблица

Частоты аллелей полиморфизма интрона 8 гена ТРБМ у пациентов и в контрольной группе

Аллели	Больные с азооспермией		Контрольная группа
	Абсолютное число	Процент	Абсолютное число	Процент
5T	13	12,7	10	4,2
7T	80	78,4	205	85,4
9T	9	8,9	25	10,4
Всего	102	100	240	100

Предложена схема молекулярно-генетического обследования пациентов с азооспермией, включающая анализ мутаций и полиморфизма интрона 8 гена ТРБМ, для установления генетической природы бесплодия у пациентов с азооспермией и профилактики МВ при проведении экстракорпорального оплодотворения.