С целью установления возможной роли вариабельности ответа лейкозных клеток на лекарственные препараты in vitro в выборе цитостатиков с неперекрывающим друг друга по эффекту действием при развитии резистентности к некоторым из них проведены сравнительные исследования чувствительности лимфоцитов при хроническом лимфоцитарном лейкозе (ХЛЛ), лимфобластов при остром лейкозе (ОЛЛ) и лимфобластоидных клеток (ЛК) лекарственно-устойчивых сублиний IM-9/Vcr и IM-9/ER. Сущность достижения и его новизна связана с использованием расчета коррелятивных отношений между цитостатическими свойствами отдельных препаратов in vitro для решения проблемы лекарственной устойчивости лейкозных клеток.

Клетки (263 образца) выделяли путем центрифугирования в плотностном градиенте из крови пациентов с ХЛЛ (из гематологических отделений 9-й клинической городской больницы и Минской областной клинической больницы) и костного мозга детей с ОЛЛ (из РНПЦ детской онкологии и гематологии). Чувствительность лейкозных клеток к лекарственным препаратам определяли с помощью 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолиум бромид (МТТ) теста. Коэффициент корреляции (R) между двумя переменными рассчитывали с помощью метода ранговой корреляции по Спирмену.

Наиболее высокие достоверные коэффициенты корреляции между активностью препаратов при ХЛЛ отмечены для идентичных препаратов флударабина (флудары и белорусского аналога флударабела), для аналогов пуриновых нуклеозидов флударабина или лейкладина и их сочетаний с циклофосфамидом, R = 0,75, 0,80, 0,80 соответственно. Корреляция между чувствительностью клеток к флударабелу и лейкладину также достаточно высокая (R=0,68). Аналогичные результаты получены и для вариантов лейкладин и флударабин+циклофосфа-мид; лейкладин+циклофосфамид и флударабин; лейкладин+циклофосфамид и флударабин+циклофосфамид. Определенная достоверная корреляция (R=0,52-0,57) выявлена в выживаемости клеток in vitro при действии циклофосфамида и доксорубицина и винкристина. При ОЛЛ высокая положительная корреляция в активности отмечена для сравниваемых в адекватных дозах преднизолона и дексаметазона (R=0,77); для препаратов антрациклинового ряда и этопозида, имеющих общие точки приложения их действия (доксорубицин-даунорубицин, доксорубицин-этопозид, даунорубицин-этопозид, R = 0,74, 0,73, 0,68 соответственно). Коэффициент корреляции цитотоксической активности in vitro в пределах R=0,69-0,50 выявлен для L-аспарагиназы и дексаметазона, винкристина и этопозида и для пары доксорубицин-цитарабин. Связь между чувствительностью клеток к ингибиторам топоизомеразы II (даунорубицин, доксорубицин, этопозид) и к дексаметазону отсутствовала совсем (R в пределах 0,25-0,17, р>0,05), тогда как достоверная, но слабая связь (R=0,49-0,30, p<0,05) способности препаратов индуцировать гибель клеток in vitro показана для дексаметазона и винкристина или цитарабина; для преднизолона и винкристина, цитарабина, L-аспарагиназы, обоих исследованных антрациклинов, этопозида, цитарабина; для винкристина и антрациклинов, этопозида, цитарабина; для L-аспарагиназы и антрациклинов, цитарабина; для даунорубицина и цитарабина; для цитарабина и этопозида. При сравнении данных, полученных для ХЛЛ и ОЛЛ по тем препаратам, к которым определялась чувствительность клеток при обоих заболеваниях (таблицы 1 и 2), можно констатировать, что связь между ответом клеток на винкристин и дексаметазон или доксорубицин, подтвержденная ста тистически, более выражена при ХЛЛ, чем при ОЛЛ. При определении перекрестных реакций в клеточных сублиниях, в которых сформировалась резистентность к этопозиду или винкристину, установлено, что у этопозид-резистентной сублинии повысилась резистентность к доксорубицину, но не изменилась к винкристину (при ОЛЛ корреляция этопозид-доксорубицин сильная, R=0,73; этопозид-винкристин – слабая, R=0,38; доксорубицин-винкристин – слабая, R=0,38). У клеток винкристин-резистентной суб- линии повысилась резистентность к этопозиду, доксорубицину, но снизилась к лейкладину или флударабелу (корреляция при ХЛЛ винкристин-доксорубицин приближается к умеренной, R=0,49; винкристин-лейкладин – слабая, R=0,39; винкристин-флударабин – слабая, R=0,39; при ОЛЛ корреляция винкристин-этопозид – слабая, R=0,38, винкристин-доксорубицин – слабая, R=0,38). При ХЛЛ слабая корреляционная связь между активностью аналогов пуриновых нуклеозидов и винкристина отражала невысокую вероятность формирования перекрестной резистентности между ними, что хорошо согласовывалось с данными исследования на винкристин-резистентной клеточной сублинии. При высокой положительной корреляционной связи (R≥0,7) препараты действуют по результативности сходным образом. Чем выше коэффициент корреляции, тем чаще может возникать перекрестная резистентность к сравниваемым препаратам. При слабой, хотя иногда и достоверной положительной корреляции (R<0,5), можно считать, что эффект от действия препаратов только частично совпадает и между ними менее вероятно формирование перекрестной резистентности. Отсюда следует целесообразность поиска препаратов, к которым реже возникает перекрестная резистентность, среди тех средств, где между цитотоксической активностью in vitro существует слабая корреляция или она вообще отсутствует.

Таблица 1

Корреляция лекарственной чувствительности клеток между препаратами, которые применяются при лечении обоих типов лейкозов, и препаратами, которые применяются для лечения каждого типа лейкоза

Препараты, применяемые в терапии ХЛЛ и ОЛЛ	Коэффициент корреляции при
	ХЛЛ			ОЛЛ
	флударабел	лейкладин	флударабел + циклофосфамид	L-аспарагиназа	цитарабин	этопозид
Доксорубицин	0,46***	0,47***	0,36***	0,46***	0,54***	0,73***
Винкристин	0,47***	0,39***	0,44***	0,52***	0,42***	0,38***
Дексаметазон	0,42***	0,52***	0,53***	0,51***	0,38**	0,21

Примечание. Корреляция достоверна с уровнем значимости * – p<0,05, ** – p<0,005, *** – p<0,0005.

Таблица 2

Корреляция лекарственной чувствительности клеток между препаратами, которые применяются при лечении обоих типов лейкозов

Препараты, применяемые в терапии ХЛЛ и ОЛЛ	Коэффициент корреляции при
	ХЛЛ		ОЛЛ
	Доксорубицин	Винкристин	Доксорубицин	Винкристин
Доксорубицин
Винкристин	0,49 ***			0,38 *
Дексаметазон	0,44 ***	0,52 ***	0,17	0,37 ***

Примечание. Корреляция достоверна с уровнем значимости * – p<0,05, ** 0– p<0,005, *** – p<0,0005.