Целью исследования является установление возможности повышения чувствительности лимфоцитов из крови пациентов с В-клеточным хроническим лимфоцитарным лейкозом (В-ХЛЛ) к наиболее широко применяемым в настоящее время при терапии ХЛЛ классам препаратов – аналогам пуриновых нуклеозидов и моноклональным антителам.

Сущность достижения заключается в определении сравнительной выживаемости лейкозных лимфоцитов in vitro при действии на них флударабела (отечественный препарат, который соответствует импортному препарату флудара) или мабтеры (ритуксимаба), представляющего собой химерическое моноклональное антитело к CD20 – гликопротеину клеточной поверхности, экспрессирующемуся на В-лимфоцитах и на их не самых ранних предшественниках, при одновременном дополнительном угнетении внутриклеточных репаративных систем. Отличие от исследований, проводимых в этом направлении ранее, заключается в том, что в этих условиях сопоставляется действие двух противолейкозных препаратов с различными механизмами запуска программы апоптоза в заведомо лекарственно-резистентных клетках.

Выживаемость лимфоцитов определяли с помощью стандартного МТТ-теста. Флударабел и ритуксимаб использовали в концентрациях, соответствующих терапевтическим. Для подавления репарации ДНК использовали ингибитор ДНК-зависимой протеинкиназы, участвующей в негомологичной репарации ДНК, – ванилин в концентрации, непосредственно не токсичной для клеток. В качестве клеток-мишеней использовали выделенные в градиенте плотности фиколл-верографина лимфоциты, жизнеспособность которых при культивировании в присутствии только препаратов превышала 70% (75,1-86,4%), т. е. образцы клеток, которые были практически резистентными к действию изучаемых препаратов. Экспрессию антиапоптотического белка BCL-2 в клетках определяли путем оценки специфического связывания флуоресцирующих моноклональных антител анти-Bcl-2 с помощью проточного цитофлуориметра. Количество CD5+ и CD20+ в образцах контролировали с помощью соответствующих моноклональных антител.

Обработка нечувствительных к флударабелу клеток с помощью ингибитора ДНК-зависимой протеинкиназы не обеспечивала снижение резистентности к цитостатическому препарату, так как при этом выживаемость клеток снизилась всего на 5,1% (р>0.05). В то же время количество нечувствительных к ритуксимабу клеток в присутствии ингибитора репарации ДНК достоверно и заметно понизилось (на 43,9%, т. е. фактически в 2 раза, р<0,001). Хотя экспрессия белка Bcl-2 существенно не отличалась в образцах флударабел- и ритуксимаб-резистентных популяциях лейкозных клеток, их ответ на ингибицию репарации ДНК оказался различным, что может быть связано с постоянно высокой экспрессией упомянутого антиапоптотического белка в лимфоцитах при ХЛЛ независимо от их чувствительности к терапевтическим агентам. Очевидно, что сформировавшаяся резистентность к флударабелу, механизм действия которого связан с угнетением синтеза и репарации ДНК, обеспечивает определенную устойчивость к повреждению репаративных систем клетки. Поэтому дополнительное вмешательство в репаративные процессы оказывается неэффективным. Механизм устойчивости к мабтере, которая запускает комплемент- и антитело-зависимый клеточный лизис, не предполагает активации репаративных систем клетки, что делает клетки менее защищенными от ингибиторов репарации ДНК.

Таким образом, с помощью факторов, влияющих на внутриклеточные репаративные системы, можно снижать устойчивость лейкозных клеток к лекарственным препаратам. Однако при этом важно учитывать конкретные механизмы формирования этой резистентности.