Цель исследования - определить изменения биологических свойств клинических изолятов сальмонелл, вызванных приобретением устойчи­вости к препаратам хинолонового ряда и разрабо­тать концепцию распространения резистентности к фторхинолонам.

Проведено изучение 355 клинических изолятов сальмонелл. Из их числа отобрано 55 штаммов, устойчивых к налидиксовой кислоте (32 штамма S.Enteritidis и 23 штамма S.Typhimurium).

Чувствительность к антибактериальным препа­ратам определяли диско-диффузионным методом и методом серийных разведений. Для 73 штаммов сальмонелл (55 устойчивых и 18 чувствительных к налидиксовой кислоте) проведено определение 28 биохимических признаков и антигенной структуры.

Определены кинетические характеристики ро­ста штаммов сальмонелл in vitro в периодической культуре и их адгезивная активность. Исследование цитопатического действия штаммов сальмонелл с различными уровнями устойчивости к налидик­совой кислоте проводились на сформированном монослое клеточной культуры HEP-2. Изучены конкурентные взаимодействия штаммов сальмо­нелл с представителями нормальной микрофлоры в смешанных периодических культурах.

Минимальные ингибирующие концентра­ции (МИК) налидиксовой кислоты хинолон-резистентных штаммов находились в диапазоне 64-256 мг/л, МИК ципрофлоксацина - в диапазо­не 0,12-1,0 мг/л. Все штаммы по чувствительности/устойчивости к ципрофлоксацину относились к категории «чувствительные» (МИК 1,0 мг/л). В пределах этой категории дополнительно вы­делена подкатегория «штаммы с устойчивостью низкого уровня» (МИК 0,25-1,0 мг/л). Устойчи­вость низкого уровня к ципрофлоксацину имели 21 штамм S.Typhimurium (84,0%) и 23 штамма S.Enteritidis (71,9%).

Из 28 биохимических тестов большинство были однотипными для всех исследованных штаммов обоих серотипов. Для признаков утилизация маль­тозы, инозита, лизиндекарбоксилазы выявлены положительные и отрицательные варианты, одна­ко не выявлено статистически значимых (p <0,05) отличий по этим признакам для чувствительных и устойчивых к налидиксовой кислоте штаммов сальмонелл.

Выявлено 2 варианта антигенной структу­ры среди 40 штаммов S.Enteritidis и 3 вариан­та антигенной структуры среди 33 штаммов S.Typhimurium. Показано, что неполный набор со­матических антигенов является скорее маркером множественной антибиотикорезистентности, но не маркером устойчивости к налидиксовой кисло­те/фторированным хинолонам.

Динамика роста культур, чувствительных к ци­профлоксацину и имеющих устойчивость низкого уровня, существенно не отличалась. Отличия (уд­линение лаг-фазы и уменьшение темпа роста в лог-фазе) выявлены только для лабораторных мутантов с МИК ципрофлоксацина 1,0 мг/л. Штаммы саль­монелл с множественной антибиотикорезистент­ностью обладали выраженной адгезивной актив­ностью. Высокая адгезивная активность является признаком полиантибиотикорезистентности саль­монелл, она не взаимосвязана с устойчивостью/чувствительностью к налидиксовой кислоте.

Штаммы S.Enteritidis независимо от их устой­чивости/чувствительности к хинолонам вызывали более интенсивный цитолитический эффект по сравнению со штаммами S.Typhimurium. Не вы­явлено значимых отличий цитопатического дей­ствия устойчивых и чувствительных к хинолонам клинических изолятов одного серотипа.

Показано, что представители нормальной микро­флоры (эшерихии) обладают высокой антагонисти­ческой активностью в отношении сальмонелл. Ин­тенсивность роста клинических изолятов сальмо­нелл в высевах на среде Эндо не зависела от уровня их устойчивости к фторированным хинолонам. Таким образом, устойчивость к хинолонам не сопровождается заметными изменениями био­логических свойств клинических изолятов саль­монелл. Можно прогнозировать, что уровень ре­зистентности в бактериальной популяции будет сохраняться на достигнутом предельно высоком уровне даже в случае резкого ограничения ис­пользования фторхинолонов в медицине и вете­ринарии (при ослаблении селективного действия препаратов) за счет развития у микроорганизмов компенсаторных мутаций и сохранения способ­ности эффективно конкурировать с сапрофитной микрофлорой.

В ходе исследования изучены биологические характеристики чувствительных и устойчивых к фторированным хинолонам штаммов сальмонелл, определены механизмы устойчивости. Разработана концепция возникновения, нарастания и закрепления резистентности к фторированным хинолонам у бак­терий рода Salmonella на популяционном уровне.

Методы серо- и резистенотипирования сальмо­нелл описаны в разработанной инструкции № 025-0306 «Серотипирование и резистенотипирование сальмонелл в эпидемиологическом надзоре за сальмонеллезной инфекцией», утвержденной Ми­нистерством здравоохранения Республики Бела­русь от 30.03.2006. Они основаны на определении фенотипических характеристик микроорганиз­мов, являются простыми, быстрыми, экономич­ными и информативными, дают сопоставимые ре­зультаты в различных лабораториях при условии использования единых стандартизированных про­токолов исследования. Данные методики позволят определять и характеризовать взаимосвязи между изолятами сальмонелл, устанавливать клональное родство штаммов и выполнять их эпидемиологи­ческое маркирование, подтверждать эпидемио­логические связи между источниками инфекции, факторами передачи и больными и, как следствие, своевременно распознавать вспышки кишечных инфекций и эффективно ограничивать их распро­странение.

Инструкция утверждена Главным государ­ственным санитарным врачом Республики Бела­русь и обязательна к использованию персоналом микробиологических лабораторий санитарно-эпидемиологических учреждений.

Выявленные эпидемиологические особенности сальмонеллеза тифимуриум (преобладание поли­резистентных штаммов, клональное распростра­нение штаммов с устойчивостью низкого уровня к фторированным хинолонам) важны для проведе­ния эпидемиологического надзора за сальмонел­лезной инфекцией и выполнения противоэпиде­мических мероприятий.

Разработанные методики имеют экономиче­ские преимущества по сравнению с аналогами: внутривидовая дифференциация штаммов может осуществляться в ходе проведения рутинных ис­следований в микробиологической лаборатории и не требует использования дополнительных специ­альных методик.

Выявление у большинства клинических изо­лятов S.Typhimurium бета-лактамаз расширенного спектра и появление устойчивости низкого уров­ня к ципрофлоксацину требует изменения тактики антибактериальной терапии сальмонеллезов - ограничения показаний для назначения антибио­тиков, дифференцированного подхода к проведе­нию антибактериальной терапии. Это позволит сохранить фторхинолоны в качестве эффективных этиотропных препаратов и ограничить использо­вание дорогостоящих препаратов резерва, сокра­тить сроки госпитализации пациентов с сальмо­неллезами.