УДК: 616.98:578.835.11]-082.35:614.3
Год издания: 2008
РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ И СОЗДАНИЕ НАБОРА ДЛЯ ЭКСТРАКЦИИ И КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ КИШЕЧНЫХ ВИРУСОВ ИЗ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ
Казинец О.Н., Амвросьева Т.В., Богуш З.Ф., Поклонская Н.В., Безручко А.А., Дедюля К.Л.
Рубрики: 76.29.50, 76.35.33
Научно-исследовательский институт эпидемиoлогии и микробиологии
Тема НИР: разработать набор для экстракции и концентрирования кишечных вирусов из пищевых продуктов и изучить уровень их вирусной контаминации.
Сроки выполнения НИР: январь 2006 г. - декабрь 2008 г.
Научный руководитель: д-р мед. наук Т.В. Амвросьева.
Источник финансирования: госбюджет.
Возникновение вспышек и наличие спорадических заболеваний вирусных инфекций, связанных с употреблением контаминированных кишечными вирусами пищевых продуктов, указывает на необходимость осуществления их постоянного санитарно-вирусологического контроля. Наиболее распространенными контаминантами пищи являются вирусы гепатита А (ВГА), норо- (НВ), рота- (РВ) и энтеровирусы (ЭВ), которые, попадая в организм человека алиментарным путем с загрязненными пищевыми продуктами, могут вызывать развитие ряда социально значимых инфекций.
Одним из важных этапов налаживания эффективного санитарно-вирусологического контроля качества пищевых продуктов является разработка эффективных, доступных для практической лабораторной службы методов и стандартизованных наборов реагентов для улавливания вирусов из пищевых продуктов - как наиболее сложной и уязвимой стадии их анализа.
Целью настоящей работы была разработка технологии и создание стандартного набора для экстракции и концентрирования вирусов из пищевых продуктов с последующим проведением его полевых испытаний.
В результате проведенных исследований разработана технология пробоподготовки пищевых продуктов различной консистенции, включающая стадии экстракции с помощью специального буферного раствора, концентрирования вирусов методом адсорбции-элюции с использованием высокоэффективного волокнистого сорбирующего материала марки Фибан и дополнительного концентрирования путем преципитации. Подобраны параметры осуществления вышеуказанных стадий обработки проб, обеспечивающие эффективность экстракции, адсорбции и элюирования вирусов не менее 80, 98 и 90% соответственно. На основании выбранных параметров разработана научно-техническая документация и создан стандартный набор химических реагентов, предназначенный для проведения экстракции и концентрирования вирусов из пищевых продуктов разной консистенции.
Эффективность использования созданного набора подтверждена в ходе проведения его полевых испытаний в процессе исследований проб, отобранных в очагах ОКИ неустановленной этиологии, на предмет выявления специфических маркеров вирусов-контаминантов (РНК и АГ), а также инфекционных ЭВ в образцах молочных продуктов, овощей, фруктов, вареных колбас, морепродуктов, расфасованных вод и напитков.
В результате проведенных исследований обнаружены маркеры детектируемого спектра вирусов - ЭВ, РВ, НВ, ВГА. Общий уровень вирусной контаминации достиг 19,0%. При этом положительные на наличие РНК и АГ пробы составили 18,1 и 5,88% соответственно. Средний уровень выявления маркеров ЭВ составил 11,31%, НВ - 6,79%, РВ - 0,9%, ВГА - 0,45%. Энтеровирусный материал (РНК и АГ) обнаруживался, исключая морепродукты, в образцах всех других исследованных групп пищевых продуктов. Наибольший уровень загрязнения ЭВ был в салатах, который достигал по показателям РНК и АГ 23,8 и 19,05% соответственно. В остальных пищевых продуктах определяемая контаминация генетическим материалом ЭВ была несколько ниже и распределялась по мере убывания следующим образом: вареные колбасы, фрукты, расфасованные воды и напитки, молочные продукты (13,33; 11,76; 11,54 и 9,57% соответственно). Такая же тенденция, но на более низком уровне, имела место при выявлении АГ ЭВ: доля положительных проб колебалась от 7,69% в расфасованных водах и напитках до 2,6% в молочных продуктах. Генетический материал НВ также обнаруживался во всех видах пищевых продуктов, исключая фрукты. Наибольшее число положительных проб зарегистрировано при исследовании проб салатов (3,33%). В пробах молочных продуктов, вареных колбас, морепродуктов, расфасованных вод и напитков уровень загрязненных НВ составил 3,48; 6,67; 10,0 и 7,69% соответственно. Контаминация пищевых продуктов РВ и ВГА отмечалась в единичных случаях. Маркеры ВГА были обнаружены только в расфасованных водах (в 0,45% исследованных образцов), а РВ - в молочных продуктах (в 0,9% проб). В процессе выделения инфекционных вирусов в культурах чувствительных клеток (RD, Нер-2с и BGM) изолировано 32 цитопатических агента, которые, по результатам идентификации в реакции нейтрализации и молекулярного типирования, были отнесены к серотипам ЭКХО 11 и ЭКХО 16. Общий уровень индикации инфекционных патогенов в исследуемых пищевых продуктах составил 9,1%.
Полученные данные свидетельствуют о наличии контаминации пищевых продуктов патогенными для человека вирусами и подтверждают необходимость их санитарно-вирусологического контроля на регулярной основе. Разработанный и успешно испытанный в ходе проведенных исследований «Набор для экстракции и концентрирования вирусов из пищевых продуктов» может быть использован в работе научно-исследовательских и практических лабораторий для анализа качества пищевых продуктов по вирусологическим показателям.
Область применения: санитарная вирусология, эпидемиология.
Рекомендации по использованию: "Набор для экстракции и концентрирования вирусов из пищевых продуктов" может быть применен для детекции вирусного загрязнения пищевых продуктов и выяснения факторов и путей передачи возбудителей вирусных инфекций, а также для научно-исследовательских целей.
Предложения по сотрудничеству: консультативная помощь по санитарно-вирусологическим исследованиям пищевых продуктов, совместные научные исследования в области пищевой вирусологии и эпидемиологии.