УДК: 616.155.392:616.006.446
Год издания: 2008

ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ЛЕЙКОЗНЫХ КЛЕТОК К ЦИТОСТАТИЧЕСКИМ ПРЕПАРАТАМ В СВЯЗИ С ЭКСПРЕССИЕЙ ГЕНА МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ MDR1/ABCB1

Свирновский А.И.Сергиенко Т.Ф.Федосенко В.В.Шман Т.ВТарас И.Б.Бакун А.В.Хлебко П.В.
Рубрики: 76.29.33
Республиканский научно-практический центр гематологии и трансфузиологии
Тема НИР: изучение роли молекулярных механизмов в формировании множественной лекарственной резистентности опухолевых клеток при различных типах лейкозов и разработка системы мониторинга чувствительности этих клеток к терапии.
Сроки выполнения НИР: I кв. 2006 г. - IV кв. 2008 г.
Научный руководитель: д-р мед. наук, проф. А.И. Свирновский, д-р мед. наук, проф. О.В. Алейникова, канд. мед. наук, доц. Д.Г. Цвирко.
Соисполнители: ГУ «Республиканский научно-практический центр детской онкологии и гематологии».
Источник финансирования: госбюджет.

Цель работы - оценить значимость экспрес­сии гена множественной лекарственной устойчи­вости MDR1/ABCB1 в лимфоцитах пациентов с В-клеточным хроническим лимфоцитарным лейко­зом (В-ХЛЛ) для прогнозирования ответа лейкозных клеток на противоопухолевые препараты in vitro.

Сущность достижения заключается в обнару­жении факта отсутствия строгой количественной связи между экспрессией мРНК MDR1 в лимфо­цитах при ХЛЛ, содержанием белка-продукта этого гена и множественной лекарственной рези­стентностью клеток in vitro.

Новизна полученных данных состоит в том, что ответ на терапевтические воздействия in vitro лей­козных лимфоцитов при ХЛЛ не может однознач­но определяться экспрессией гена множественной лекарственной устойчивости MDR1.

Ген множественной лекарственной резистент­ности MDR1 кодирует белок Р-гликопротеин, функция которого напрямую связывается с устой­чивостью к ряду препаратов (доксорубицин, вин­кристин, этопозид) в опухолевых клетках. Для детекции белка P-гликопротеина на поверхности лейкозных лимфоцитов использовали монокло­нальные антитела к P-gp 170 (клон 17F9) (BD Pharmingen, США), меченные красителем флуо­ресцеин изотиоцианатом (FITC). Анализировали не менее 10000 клеток в каждом образце с ис­пользованием программы CellQuestPro. Уровень опре­деляли методом относительной количественной полимеразной цепной реакции в режиме реально­го времени по отношению к экспрессии данного гена в клеточной линии IM-9. Для нормализации количества кДНК, вносимой в реакцию, исполь­зовали нормальный ген GUS. Амплификацию проводили в конечном объеме реакционной сме­си, равном 25 мкл и содержащем кДНК, Platinum Quantitative PCR SuperMix-UDG (Invitrogene), ко­нечная концентрация MgCl2 была повышена до 4 мМ, 300 нМ каждого из праймеров и 200 нМ Taq-Taq­Man. Чувствительность к лекарственным препара­там определяли с помощью цитотоксического теста с 3-4,5-диметилтиазол-2-ил-2,5-дифенилтетразолия бромидом (МТТ, Sigma). При статистической обра­ботке использовали непараметрические методы, т. к. распределение полученных параметров отличалось от нормального. Результаты представлены в виде медианы, в скобках указаны 25-75 персентили.

Экспрессию гена MDR1 оценивали в 20 об­разцах лейкозных лейкоцитов. Содержание мРНК MDR1 в исследованных образцах варьировало в значительной степени от 12 до 8583 отн. ед. Не выявлено достоверных различий между экспрес­сией данного гена в клетках пациентов, не полу­чавших терапию, и в клетках больных ХЛЛ после лечения, соответственно 359 (155-744) против 853 (193-954) отн. ед.

При исследовании зависимости между экс­прессией гена MDR1 и количественным содержа-MDR содержане установлено, что количество белка на поверх­ности клеток коррелирует с содержанием мРНК гена, кодирующего Р-гликопротеин.

При анализе содержания мРНК MDR1 в лим­фоцитах при ХЛЛ, чувствительных и устойчивых к химиопрепаратам (табл.), показано увеличенное содержание мРНК MDR1 в клетках, резистент­ных к хлорамбуцилу. Для других исследованных цитостатических препаратов, в т. ч. и для непо­средственных субстратов P-гликопротеина, ста­тистически значимых различий установлено не было. Корреляционный анализ по Спирману так­же не выявил зависимости между экспрессией гена MDR1 и чувствительностью клеток к моно- и комбинированным воздействиям цитостатиков in vitro (p>0,05).­

Таблица

Относительная экспрессия гена MDR1 в лейкозных клетках с различной чувствительностью к цитостатическим препаратам

Исследованные химиопрепараты Относительная экспрессия MDR1 (отн. ед.) в лимфоцитах при ХЛЛ с различным ответом на терапевтические агенты Р
Чувствительные Резистентные
Циклофосфан 385 (306-953) 524 (155-809) 0,8
Хлорамбуцил 250 (79-358) 776 (357-1049) 0,03
Доксорубицин 727 (194-954) 301 (166-469) 0,6
Винкристин 385 (194-809) 617 (149-1022) 0,6
Флударабел 332 (175-683) 727 (180-898) 0,9
Лейкладин 412 (194-809) 525 (190-898) 0,8

Таким образом, одновременно с отсутствием корреляционной зависимости между экспрессией белка Р-гликопротеина и гена MDR1 количество копий мРНК гена MDR1 не определяет резистент­ность лейкозных клеток к специфическим суб­стратам P-гликопротеина in vitro.


Область применения: онкогематология, молекулярная онкология.
Рекомендации по использованию: в клинико-лабораторных исследованиях по прогнозу и контролю ответа пациентов с лейкозами на терапию.
Предложения по сотрудничеству: параллельное проведение молекулярно-генетических и клинико-лабораторных исследований с целью выявления маркеров прогноза течения заболевания и ответа на терапию.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2022 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта