Цель исследования - создание современной системы диагностики и профилактики наиболее распространенных нейродегенеративных заболе­ваний в Беларуси.

Нейродегенеративные заболевания представ­ляют собой клинически обширную группу на­следственных заболеваний нервной системы. Не­вральная амиотрофия Шарко-Мари-Тус (Charcot-Marie-Tooth) - генетически гетерогенная группа наследственных заболеваний периферической нервной системы с преимущественно аутосомнодоминантным типом наследования. Выделяют 4 типа и несколько подтипов заболевания.

Суммарная частота различных форм амиотро­фии Шарко-Мари-Тус по данным литературы ва­рьирует от 1 до 4 на 10000 населения и является самой высокой среди наследственных заболева­ний периферической нервной системы.

Основной ген, ответственный за развитие не­вральной амиотрофии Шарко-Мари-Тус тип 1 в более чем 70% семей, расположен на коротком плече 17-й хромосомы в локусе 17p 11.2 и коди­рует синтез структурного белка периферического миелина РМР22. Миелиновый ген РМР22 флан­кируется высокогомологичными повторами ДНК, между которыми в мейозе может происходить не­равный кроссинговер, в результате которого обра­зуются 2 различные аномальные хромосомы: одна из них содержит тандемную дупликацию области длиной 1,4 Мб, другая- делецию той же области, причем в обоих случаях область хромосомной пе­рестройки захватывает ген РМР22. Дупликация этого гена на одной из хромосом и является перво­причиной, приводящей к возникновению невраль­ной амиотрофии Шарко-Мари-Тус тип 1А.

Для ДНК-диагностики заболевания использу­ется метод количественного определения аллелей внутрилокусных полиморфных маркеров. У боль­ного с невральной амиотрофией Шарко-Мари-Тус тип 1А маркеры, расположенные рядом с геном PMP22, будут иметь три аллеля за счет дуплика­ции этого участка на одной из хромосом. Наиболее подходящими маркерами для такого анализа явля­ются ди- и тетрануклеотидные повторы, которые также называют микросателлитными. Эффектив­ность исследования можно значительно повысить путем определения нескольких маркеров за счет информативности как минимум одного из них.

Для разработки протокола диагностики не­вральной амиотрофии Шарко-Мари-Тус тип 1А проводились определение и оценка информатив­ности 5 внутрилокусных микросателлитных мар­керов D17S2218, D17S2220, D17S2223, D17S2226 и D17S2229 в популяции Беларуси. Их гетерози­готность рассчитывалась по формуле:

где q - частота каждого аллеля. Она состави­ла 81,2% для маркера D17S2218, 90,7% - для D17S2220, 72% - для D17S2223, 81,2% - для D17S2226, 84,3% - для D17S2229. Установлен­ные уровни гетерозиготности исследованных маркеров свидетельствуют об их высокой инфор­мативности.

С учетом полученных результатов о характери­стиках и информативности маркеров были разра­ботаны условия мультиплексной ПЦР и капилляр­ного электрофореза, позволяющих одновременно анализировать три высокополиморфных ДНК-маркера локуса р11.2 хромосомы 17: D17S2218, D17S2223 и D17S2229.

Молекулярно-генетический анализ выполнен у 200 человек (97 пробандов с клинически предпо­лагаемыми диагнозами нервно-мышечных забо­леваний и 103 члена их семей). Дупликация гена РМР22 идентифицирована в 35 пробах ДНК (от 16 пробандов и 19 членов их семей). В 12 случа­ях дупликация имела наследственный характер, в 2 случаях была результатом de novo мутации, а в 2 случаях характер возникновения мутации не был установлен из-за невозможности обследования родственников пробандов. Соотношение заболев­ших мужчин и женщин примерно одинаково и со­ставляет 17 и 18 человек соответственно.

Исследования показали, что разработанная технология диагностики невральной амиотрофии Шарко-Мари-Тус тип 1А обладает высокой точ­ностью и информативностью, а одновременный анализ трех высокополиморфных ДНК-маркеров локуса р11.2 хромосомы 17 повышает эффектив­ность диагностики до 97-99%, сокращая время анализа и снижая его стоимость.

Применение молекулярно-генетических ме­тодов в неврологии позволяет не только прово­дить точную диагностику имеющейся патологии, но и способствует уточнению симптоматической картины заболеваний, улучшению их ранней кли­нической диагностики. Выявление семей, отяго­щенных наследственной нейродегенеративной патологией, дает возможность своевременно на­чать лечение, проводить профилактику, в т. ч. и с использованием пренатальной диагностики.