УДК: 616-24.002.5-07:541.124.7
Год издания: 2009

Тест-система для диагностики туберкулеза и определения устойчивости к рифампицину методом полимеразной цепной реакции в реальном времени

Слизень В.В.Суркова Л.К.Титов Л.П.Залуцкая О.М.
Рубрики: 76.03.4376.29.53
Научно-исследовательский институт пульмонологии и фтизиатрии
Тема НИР: «Разработать тест-систему для молекулярно-генетической диагностики туберкулеза и изучить молекулярные механизмы формирования резистентности возбудителя туберкулеза в Республике Беларусь».
Сроки выполнения НИР: октябрь 2006 г. — сентябрь 2009 г.
Научный руководитель: д-р мед. наук Л.К. Суркова.
Источник финансирования: госбюджет.

Проблема множественной лекарственной устойчивости (МЛУ) M.tuberculosis (МБТ), т. е. устойчивости к изоназиду и рифампицину, остается чрезвычайно актуальной в течение последнего десятилетия во многих странах мира, в т. ч. в Республике Беларусь. Выявление возбудителя туберкулеза и определение его лекарственной чувствительности с использованием традиционных бактериологических методов требует до 3 мес., что обусловливает актуальность разработки быстрых методов детекции лекарственной устойчивости возбудителя туберкулеза. Выявление устойчивости к рифампицину используется в качестве маркера множественной резистентности микобактерий, поскольку, в соответствии с данными литературы, резистентность к рифампицину у 80-90% штаммов МБТ коррелирует с устойчивостью к изониазиду.

Целью настоящей работы являлась разработка тест-системы для диагностики туберкулеза и определения устойчивости к рифампицину методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени.

В ходе разработки тест-системы проведена оптимизация метода экстракции ДНК из проб диагностического материала от пациентов, подобраны праймеры и зонды, отработаны параметры ПЦР.

Последовательность исследований с помощью разработанной тест-системы включает взятие пробы диагностического материала; выделение ДНК микобактерий туберкулеза, находящихся в биологическом материале; проведение ПЦР для амплификации специфического генетического маркера M.tuberculosis - инсерционной последовательности IS 6110, а также 507, 516, 526, 531 кодонов rpoB гена микобактерий туберкулеза с одновременной гибридизацией с флюоресцирующими TaqMan зондами; анализ флюоресценции с помощью прибора ПЦР в реальном времени и интерпретация результатов.

Метод ПЦР в реальном времени с использованием TaqMan зондов показал возможность быстрой (6 ч) детекции МБТ и определения чувствительности МБТ к рифампицину у 87,2% МЛУ штаммов МБТ с профилем точечных мутаций, установленным методом секвенирования.

Лабораторные испытания разрабатываемой тест-системы с использованием заведомо чувствительных и устойчивых к рифампицину штаммов МБТ в сопоставлении с бактериологическими методами определения ЛУ выявили высокую чувствительность (90%) и специфичность (90%) детекции возбудителя туберкулеза и определения множественной лекарственной устойчивости МБТ с использованием разработанной тест-системы.


Область применения: фтизиатрия, микробиология.
Рекомендации по использованию: метод может применяться в ЛПУ.
Предложения по сотрудничеству: консультативная помощь при внедрении.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2022 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта