Эффективность вирулицидного действия дезинфектантов в отношении возбудителей вирусных инфекций оценивается с использованием двух существенно различающихся подходов. Во-первых, это применение вирусов-моделей, т. е. определенных наименований (штаммов) вирусов, которые признаются адекватными критериями резистентности для широкого спектра вирусов. При этом результаты изучения вирулицидного действия дезинфектантов на вирусах-моделях априори считаются репрезентативными и для ряда вирусных агентов, непосредственно не подвергавшихся испытаниям. Этот подход распространен в странах Европы и СНГ, включая Беларусь.

В отношении вируса гепатита А (ВГА) и других кишечных вирусов такой моделью является вирус полиомиелита I типа (Wolff M.H. et al., 2001), несмотря на то, что по результатам многочисленных исследований ВГА является более устойчивым чем полиовирус к воздействию физических и химических факторов (Biziagos E. et al., 1988; Nainan O.V. et al., 2006).

Второй подход заключается в том, что вирулицидная активность дезинфектанта может быть декларирована только в отношении тех вирусов, непосредственно на которых проводилось тестирование препарата. Этот подход используется в США и Канаде. При этом изучение вирулицидного действия в отношении ВГА, как правило, проводится на немногочисленных культивируемых штаммах вируса. Однако ранее было показано, что лабораторные штаммы ВГА обладают неодинаковой чувствительностью к воздействию таких физических факторов, как гидростатическое давление и температура (Shimasaki N. et al., 2009).

Из-за сложности культивирования ВГА в некоторых случаях при изучении вирулицидного действия препаратов об изменении содержания вирусных частиц в пробе под воздействием дезинфектантов судят по результатам полимеразной цепной реакции (ПЦР) или иммуноферментного анализа (ИФА). При этом детекция вирионов в каждой из этих реакций проводится лишь по одному вирусному маркеру: нуклеиновой кислоте при использовании ПЦР или антигену при использовании ИФА. Однако было установлено, что использование одного из этих методов недостаточно для определения резистентности вируса и эффективности дезинфектантов (Li J.W. et al., 2002).

Адекватным методическим приемом может стать антигенсвязывающая полимеразная цепная реакция (АС-ПЦР), предложенная R.W. Jansen et al. (1990) для селективной амплификации антиген-ассоциированной нуклеиновой кислоты ВГА и способная выявлять полноценные вирусные частицы без процесса культивирования. Суть метода заключается в детекции вируса сразу по двум маркерам - антигену и геному, которая проводится путем обнаружения нуклеиновой кислоты возбудителя в вирионах, предварительно связанных в специфических иммунных комплексах на твердофазной подложке. Наличие у выявляемых вирусных частиц специфических белково-нуклеиновых комплексов с большой долей вероятности свидетельствует об их морфологической и функциональной полноценности.

Ранее нами с помощью разработанной методики АС-ПЦР и соответствующего коммерческого набора «АС-ПЦР ВГА» были определены особенности выявления ВГА с помощью ИФА, традиционной ПЦР и АС-ПЦР после обработки вируса формалином и этанолом. Установлено, что в ИФА обнаруживался неповрежденный после обработки вируса формалином антиген, в ПЦР - сохраняющаяся в этаноле вирусная РНК, и только АС-ПЦР выявляла полноценные инфекционные вирионы, а не отдельные фрагменты вируса (Гудков В.Г. и соавт., 2006).

Применение АС-ПЦР для изучения резистентности выделенного на территории Беларуси штамма ВГА к некоторым группам химических соединений и отдельным химическим веществам, использующимся в качестве основных действующих субстанций в производстве дезинфектантов, показало, что ВГА обладает выраженной резистентностью к большинству изученных веществ при воздействии на возбудитель в режимах, предусмотренных для проведения дезинфекции.

С помощью АС-ПЦР нами также изучена эффективность ряда зарегистрированных в республике дезинфектантов в отношении ВГА. Четыре препарата не соответствовали нормативам снижения инфекционной активности. Это свидетельствует о необходимости селективного испытания дезинфектантов в отношении высокорезистентных возбудителей или однородной по резистентности группы возбудителей (Плотникова К.Ю. и соавт., 2008).

Сравнительное изучение устойчивости лабораторных штаммов HAV707 и HAV027 к воздействию 70% этанола методом АС-ПЦР показало различие в снижении концентрации вирусных частиц этих штаммов под воздействием этанола более чем на 3 lg (значения составили 0,4 и 3,5 lg соответственно). Десятикратные разведения суспензии штамма HAV707 оказались более чувствительными к воздействию этанола (1,4 и 1,8 lg для разведения в 10 и 100 раз соответственно), но при этом критического значения в 3,5 lg достигнуто не было.

Таким образом, разработан метод оценки вирулицидной активности дезинфектантов и эффективности дезинфекции в отношении ВГА и других некультивируемых вирусов.

У

читывая существенные различия в степени резистентности различных вирусов и их штаммов к воздействию вирулицидных факторов, следует пересмотреть подход к использованию вирусов-моделей при оценке дезинфектантов и эффективности дезинфекции в Беларуси.

Вид патентной защиты: Способ определения вирулицидного действия дезинфектантов: пат. 12311 Респ. Беларусь, МПК7 А 61L 2/16 / В.Г. Гудков, К.Ю. Плотникова, А.С. Виринская; заявитель ГУ «НИИ эпидемиологии и микробиологии» Министерства здравоохранения Республики Беларусь.