УДК: 616.98:579.882]:547.96-053.6
Год издания: 2009

Изучение морфогенеза гранулем при хламидийной урогенитальной инфекции у девочек и экспериментальная стимуляция антителогенеза к белку теплового шока Chlamydia Trachomatis

Рубаник Л.В.Руденко Д.Н.Капитулец С.П.Капитулец Н.Н.Полещук Н.Н.
Рубрики: 76.29.4776.29.50
Научно-исследовательский институт эпидемиoлогии и микробиологии
Тема НИР: «Роль хламидийного белка теплового шока в развитии гиперчувствительности замедленного типа и механизмах формирования гранулем».
Сроки выполнения НИР: апрель 2007 г. — март 2009 г.
Научный руководитель: канд. биол. наук Л.В. Рубаник.
Источник финансирования: госбюджет, Республиканский фонд фундаментальных исследований № Б07М-168 от 01.04.07.

Цель работы - изучение роли белка теплового шока Chlamydia trachomatis в формировании протективного иммунитета, морфогенезе гранулем и механизмах становления персистентной хламидийной инфекции.

Исследования проведены на клиническом и экспериментальном материале. Хламидийная урогенитальная инфекция диагностирована с помощью метода флуоресцирующих антител, культурального метода и полимеразной цепной реакции у всех 18 обследуемых девочек с хроническим гранулярным циститом. При серологическом исследовании сыворотки крови этих пациенток только у 6 из 18 (33,3%) выявлены IgG к белку теплового шока C.trachomatis с молекулярной массой 60 кДа (БТШ-60). При этом у 4 из 18 (22,2%) регистрировались IgG к БТШ-60 C.trachomatis при отсутствии IgM, IgA, IgG к главному наружному белку мембраны. Полученные результаты свидетельствуют, что при серологической диагностике наряду с определением IgM, IgA, IgG к главному наружному белку мембраны C.trachomatis информативны исследования на наличие IgG к БТШ-60.

При гистологическом анализе гранулем, полученных из мочевого пузыря девочек при цистоскопии, отмечены явления очагово-диффузного полиморфизма и нуклеарной инфильтрации. В собственной пластине инфильтрата регистрировались скопления лимфоцитов, плазматических клеток, нейтро- и эозинофильных лейкоцитов. В субэпителиальной ткани отмечалась картина резко выраженного хронического воспаления, что указывает на развитие реакции гиперчувствительности замедленного типа, направленной на элиминацию возбудителя. В гранулеме отмечались явления как пролиферации, так и дистрофии клеток. В перикапиллярной области процесс распада клеток происходил преимущественно по типу некроза. Наряду с дистрофическими изменениями в некоторых очагах превалировали репаративные процессы на фоне пролиферации фибробластов и гиперпродукции коллагеновых волокон.

При электронной микроскопии ультратонких срезов клеток гранулем отмечена активная репродукция возбудителя C.trachomatis. Впервые получены доказательства прямого участия хламидий в формировании гранулем. При этом в различных локусах инфильтратов выявлены как ретикулярные, промежуточные, элементарные тельца, так и абберантные (дефектные) тельца возбудителя. Наличие последних, по данным литературы, является одним из признаков латентной и персистентной формы хламидийной инфекции.

В то же время иммуногистохимический анализ биоптатов не позволил выявить в клетках с активной репродукцией возбудителя скоплений БТШ-60 C.trachomatis. Полученные данные свидетельствуют в пользу того, что этот белок не накапливается в значительных количествах в гранулеме и для его выявления необходимо использовать более чувствительные методы.

Кроме исследования клинического материала изучена роль БТШ-60 в формировании протективного иммунитета на лабораторных животных. Для моделирования экспериментальной хламидийной инфекции in vivo использовали штамм C. trachomatis МТ-2А Национальной коллекции вирусов и бактерий НИИЭМ (депонент НКВ-№Х3-3 от 14.11.02), накапливающийся в культуре клеток МсСоу через 72 ч в титре 5Ч105 ТЦД 50/мл. Штамм C. trachomatis МТ-2А относится к серовару D и имеет 95% гомологии с нуклеотидной последовательностью ompA гена стандартного штамма D/B185. Особенностью штамма C. trachomatis МТ-2А является наличие в ompA гене двух нуклеотидных замен. В позиции 574 константного домена отмечена синонимичная замена цитозина на тимин, не приводящая к изменению аминокислоты в белке. В 843 положении третьего вариабельного домена имеется несинонимичная замена тимина на гуанин, которая приводит к замене валина на глицин, что обуславливает повышенную иммуногенность штамма C.trachomatis МТ-2А.

При экспериментальной внутривагинальной хламидийной инфекции у всех мышей BALB/c на 10-е сутки титр IgG к БТШ-60 C.trachomatis достигал значения 1:40. На 20-й день после инфицирования отмечался 8-кратный прирост титра антител - 1:320. На 30-й день зарегистрировано снижение титра до 1:196. Далее на 40-е сутки эксперимента титры IgG к БТШ-60 C.trachomatis увеличивались до 1:320, что, вероятно, свидетельствует об особенностях экспрессии белка в ходе репродукции возбудителя.

Как подкожное, так и внутривагинальное введение инактивированного антигена (обработанный формалином штамм C.trachomatis МТ-2А с полиоксидонием) также приводило к выработке IgG к БТШ-60 C.trachomatis у животных. При этом трехкратное подкожное введение вызывало продукцию антител в титрах 1:5120 (после 1-го введения), 1:10240 (после 2-го введения), 1:5120 (после 3-го введения), что указывает на выраженную стимуляцию антителогенеза и развитие бустерного эффекта. При трехкратном внутривагинальном введении антигена титры IgG к БТШ-60 C.trachomatis в сыворотке крови мышей составили 1:40, 1:640 и 1:40 соответственно. То есть из двух анализируемых способов при подкожном введении мышам инактивированного антигена отмечаются статистически более высокие титры IgG к БТШ-60 C.trachomatis.

Таким образом, в мочевом пузыре у девочек формирование гранулем протекает по типу реакции гиперчувствительности замедленного типа с репродукцией в очагах поражения зрелых элементарных частиц возбудителя и выработкой БТШ-60. Однако при установлении персистентной и латентной форм инфекции данный белок может не экспрессироваться. Эксперименты показывают, что антитела к БТШ-60 играют важную роль как в протективном иммунитете, так и, возможно, в иммунопатогенезе хламидиозов.


Область применения: микробиология, детская урология, вакцинология.
Рекомендации по использованию: результаты работы внедрены в работу урологического отделения ГУ «2-я городская детская клиническая больница г. Минска» и включены в курс лекций «Новые технологии в диагностике и лечении хламидийной инфекции у детей» на 1-й кафедре детских болезней Белорусского государственного медицинского университета.
Предложения по сотрудничеству: совместные исследования по изучению роли БТШ-60 C. trachomatis в протективном иммунитете, экспериментальное и, возможно, клиническое изучение иммуногенеза при хламидийной урогенитальной инфекции.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2022 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта