Цель работы - сравнить эффективность действия ингибиторов репарации ДНК и белков семейства АВС на устойчивые и чувствительные к флударабелу клетки при хроническом лимфоцитарном лейкозе (ХЛЛ).

Сущность достижения заключается в оценке ответа лейкозных лимфоцитов in vitro на вещества, которые способны подавлять активность ферментов, участвующих в репарации ДНК, и транспортных белков при терапии флударабелом.

Новизна исследования состоит в установлении факта подавления жизнеспособности флударабел-резистентных лейкозных лимфоцитов в большей степени, чем флударабел- чувствительных клеток при ХЛЛ, с помощью ингибиторов репарации ДНК и белков множественной лекарственной устойчивости.

Терапия флударабелом при ХЛЛ широко используется в настоящее время и рассматривается как наиболее эффективная. Однако у некоторых пациентов имеется лекарственная устойчивость уже при постановке диагноза или, что чаще бывает, она формируется во время курса лечения, обусловливая соответствующие клинические проявления лекарственной нечувствительности (рецидив, рефрактерная болезнь). При учете известных молекулярных механизмов действия флударабела (ингибирование многих видов репарации ДНК), а также закономерностей формирования лекарственной устойчивости, использование ингибиторов репарации ДНК может лечь в основу новой стратегии лечения в дополнение к разработке лекарственных сочетаний, предусматривающих подавление репарации.

Поскольку ДНК-зависимая протеинкиназа (ДНК-ПК), киназы ATM и ATR играют важную роль среди белков, участвующих в негомологичном слиянии концов, гомологической рекомбинации, которые являются сутью репарации, и, возможно, эксцизионной репарации нуклеотидов, оценивали ответ флударабел-устойчивых и флударабел-чувствительных клеток при ХЛЛ на действие ингибиторов ДНК-ПК (ванилин и NU7026) и ингибиторов АТМ (кофеин) in vitro. Для этой цели использовали МТТ-тест.

Параллельно с ингибиторами репарации ДНК исследовали ответ клеток к модификатору активности белков множественной лекарственной устойчивости циклоспорину А (CsA) для оценки вклада белков семейства АВС в формирование лекарственной устойчивости к флударабелу, хотя эти белки не считаются главными переносчиками флударабела в клетках ХЛЛ.

По проценту выживания клеток после культивирования с флударабелом все образцы лимфоцитов пациентов с ХЛЛ разделены на чувствительные (25,9% из 116 образцов), устойчивые (19%) или с промежуточной чувствительностью (55,1%). Установлены значимые различия в действии ингибиторов репарации ДНК и ингибиторов транспортных белков в чувствительных и устойчивых к флударабелу клетках ХЛЛ. Более сильный эффект изучаемых ингибиторов показан для флударабел-устойчивых клеток по сравнению с флударабел-чувствительными. Кофеин, ванилин, NU7026 и CsA увеличивали цитотоксичность флударабела в 50, 27, 33 и 43% устойчивых образцов по сравнению с 0, 16, 8 и 0% чувствительных проб соответственно. Результаты по образцам клеток с умеренной чувствительностью к флударабелу (выживаемость находилась в диапазоне от 35 до 70%) не были столь убедительны, как для чувствительных и устойчивых проб. Полученные данные имеют принципиальное значение, так как обычно устойчивые клетки хуже реагируют на терапевтические агенты по сравнению с чувствительными клетками.

Несмотря на изучение репарации ДНК и механизмов множественной лекарственной устойчивости при ХЛЛ в настоящее время затруднительно однозначно охарактеризовать выявленную связь между устойчивостью к флударабелу и ответом клеток на действие ингибиторов репарации. Прогностическое значение наблюдаемого феномена пока не имеет обоснованного объяснения, что не исключает его значимости. Тем не менее, эти выводы можно использовать в реализации новой стратегии лечения, основанной на подавлении белков МЛУ и репарации ДНК во флударабел-устойчивых клетках ХЛЛ, так как элиминация этих клеток является главным условием эффективного лечения данной патологии.