Использование естественных киллерных (ЕК) (CD3-CD56+) и естественных киллерных Т (ЕКТ) клеток (CD3+CD56+) является новой терапевтической стратегией лечения пациентов с различными типами новообразований, в т. ч. острых лейкозов. Для усиления клинического эффекта применения цитотоксических клеток необходима их активация, которая возможна при использовании цитокинов - интерлейкина (ИЛ)-2, ИЛ-15 и ИЛ-12.

Целью данной работы являлось изучение противоопухолевой активности цитотоксических клеток периферической крови здоровых доноров и пациентов с острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ).

Объектом исследования являлись мононуклеарные клетки (МНК) периферической крови 29 пациентов в возрасте от 1 года до 18 лет с диагнозом ОЛЛ, находящихся в ремиссии после основного лечения, и 45 здоровых доноров. Выделенные из периферической крови МНК культивировали в полной питательной среде IMDM в концентрации 1 млн/мл в присутствии следующих цитокинов: ИЛ-2 (1000 МЕ/мл; препарат Ронколейкин, Биотех, Россия), ИЛ-15 и ИЛ-12 (по 10 нг/мл, StemCell Technologies, Канада) или без них в течение 4 сут.

По окончании культивирования определяли: количество и жизнеспособность МНК в культуре с использованием красителя трипанового синего; субпопуляционный состав исследуемых клеток с использованием моноклональных антител к CD3, CD56, CD69 (BD, США; Beckman Coulter, США) методом проточной цитофлуориметрии, активацию оценивали по экспрессии поверхностного клеточного маркера CD69; 3) противоопухолевую активность МНК с применением флуоресцентных красителей - карбоксифлуоресцеиндиацетат-сукцинимидил эфира и пропидиум иодида с помощью проточной цитометрии. В качестве клеток-мишеней использовали эритромиелобластоидную линию К-562 и лейкозные клетки пациентов с ОЛЛ. Соотношения эффектор:мишень составили 10:1, 20:1 и 40:1.

В ходе проведенных исследований показано достоверное (р <0,05) увеличение процента активированных ЕК и ЕКТ клеток при инкубации МНК доноров в присутствии исследуемых цитокинов - ИЛ-2, ИЛ-15 и ИЛ-12 по сравнению с контрольными образцами. При этом была заметна значительная разница между активационным эффектом ИЛ-2 или ИЛ-15 по отношению к ИЛ-12 (р <0,05). Каждый из изучаемых цитокинов также достоверно повышал активность цитотоксических клеток в отношении опухолевой линии К-562 (ИЛ-2 - р <0,0001, ИЛ-15 - р <0,01, ИЛ-12 - р <0,05). По сравнению с неактивированными клетками МНК стимулированные ИЛ-2 или ИЛ-15 имели больший цитотоксический потенциал, чем МНК, стимулированные ИЛ-12 (р <0,05). Так как не было выявлено достоверных различий в активирующем действии ИЛ-15 и ИЛ-2, последний был выбран для экспериментов с использованием МНК пациентов.

При изучении функциональной активности МНК детей с ОЛЛ показано, что ИЛ-2 достоверно повышал процент активированных ЕК и ЕКТ клеток (р <0,0001) и цитотоксическую активность их МНК против линии К-562 (р <0,005). Однако количество активированных цитотоксических клеток пациентов было в 2 раза ниже аналогичных показателей доноров. Так, активация ЕК и ЕКТ клеток пациентов при стимуляции ИЛ-2 повышалась в 13,6±0,7 и 6,5±0,4 раза, тогда как для доноров - в 28,6±5,1 и 13,5±6,8 раза соответственно. Цитотоксическая активность МНК больных была также снижена по сравнению с активностью донорских МНК против линии К-562 при всех исследуемых соотношениях (р <0,005). При этом лейкозные клетки достоверно (р <0,05) менее чувствительны по сравнению с клетками линии К-562 к эффекторному действию как донорских, так и аутологичных МНК, в т. ч. стимулированных ИЛ-2.