УДК: 616.155.392+616-006.441]-085.277.3-053.2
Год издания: 2009

Прямое и опосредованное действие антиCD20 моноклональных антител при В-клеточных лейкозах и лимфомах у детей

Вашкевич Е.П.Белевцев М.В.Федорова А.С.
Рубрики: 76.03.5576.29.33
Республиканский научно-практический центр детской онкологии и гематологии
Тема НИР: «Исследование эффекторных механизмов противоопухолевого действия моноклональных антител при В-клеточных лейкозах и лимфомах у детей».
Сроки выполнения НИР: 01.04.2007 г. — 31.03.2009 г.
Научный руководитель: Е.П. Вашкевич.
Источник финансирования: договор с БРФФИ № Б07М-199 от 01.04.2007.

В настоящее время использование специфических моноклональных антител в качестве точечной иммунотерапии является актуальным и перспективным методом лечения онкологических заболеваний.

Цель исследования - изучить in vitro противоопухолевое действие антиCD20 моноклональных антител (мАТ) при В-клеточных лейкозах и лимфомах у детей.

Объектом исследования являлись: 1) опухолевые клетки, полученные от 120 детей с В-линейным острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ), 14 - с острым миелоидным (ОМЛ), 12 - с Т-линейным ОЛЛ, 15 - с В-клеточными неходжкинскими лимфомами (НХЛ), 2 - с Т-клеточными НХЛ; 2) нормальные гемопоэтические клетки периферической крови от 18 здоровых доноров. Лейкозные клетки выделяли из костного мозга на градиенте плотности Histopaque. Лимфомные клетки получали путем центрифугирования асцитной жидкости либо ресуспендирования опухолевой ткани (лимфатические узлы). Нормальные В-лимфоциты выделяли из мононуклеарных клеток периферической крови (МНК) с помощью отрицательной иммуноселекции с использованием наборов фирмы StemCellTechnology (Канада). В качестве антиCD20 мАТ использовали препарат Ритуксимаб (Мабтера, Хоффманн-Ля Рош, Швейцария).

В работе изучали уровень апоптоза опухолевых и нормальных клеток, антитело-зависимую клеточную цитотоксичность (АЗКЦ), комплемент-зависимую цитотоксичность (КЗЦ) с помощью метода проточной цитофлуориметрии.

В результате проведенного исследования показано, что все случаи В-клеточных НХЛ были позитивными по антигену CD20. В-лимфомные клетки (более 90%) экспрессировали данный маркер с высокой степенью интенсивности флуоресценции. В-линейные ОЛЛ характеризовались выраженной гетерогенностью экспрессии рецептора CD20. Доля клеток, экспрессирующих CD20, варьировала от 0 до 97%. При этом лейкозы считали позитивными, если процент клеток, несущих CD20-антиген, был больше либо равен 20. Из 100 В-линейных ОЛЛ 41 случай был позитивным по CD20 маркеру. При Т-клеточных НХЛ, Т-линейных ОЛЛ и ОМЛ удельный вес CD20+ клеток не превышал 3. Среди субпопуляций нормальных лейкоцитов CD20 экспрессировался на В-лимфоцитах и не обнаруживался на Т-лимфоцитах, гранулоцитах и моноцитах.

При изучении прямого действия антиCD20 мАТ не было выявлено значительных изменений в уровне апоптоза среди опухолевых клеток, полученных от детей с CD20-позитивными В-клеточными острыми лейкозами/лимфомами, и нормальных В-лимфоцитов при их культивировании с данными антителами в течение 1 сут.

Для исследования АЗКЦ клетки-мишени (лейкозные/лимфомные клетки пациентов и нормальные В-лимфоциты) предварительно инкубировали с антиCD20 мАТ, а затем смешивали с клетками-эффекторами (МНК доноров) в соотношении 100:1. Выявлено, что антиCD20 мАТ достоверно (р <0,00005) усиливали цитотоксическую активность МНК доноров против CD20-позитивных образцов опухолевых клеток и нормальных В-клеток. Так, например, доля лизированных клеток-мишеней для CD20+ лейкозных образцов возрастала с 31,4±1,3% в контроле (при инкубации опухолевых клеток только с МНК) до 49,7±1,2% в опыте (после предварительной инкубации опухолевых клеток с антиCD20 мАТ); для CD20+ лимфомных образцов значения составили соответственно 16,5±1,1 и 37,6±1,2%. При этом присутствие антиCD20 мАТ не влияло на количество поврежденных CD20-негативных клеток. Кроме того, чувствительность CD20+ лейкозных/лимфомных клеток пациентов, обработанных антиCD20 мАТ, была выше к цитотоксическому действию МНК, активированных в течение 4 сут интерлейкином-2 в концентрации 1000 МЕ/мл, по сравнению с неактивированными МНК.

При исследовании КЗЦ клетки-мишени (см. выше) инкубировали с различными концентрациями антиCD20 мАТ в присутствии 20%-й нормальной сыворотки человека. Было показано, что антиCD20 мАТ в культуре дозозависимым образом индуцировали комплемент-зависимую цитотоксичность против нормальных В-лимфоцитов и опухолевых клеток, полученных от детей с CD20+ В-клеточными острыми лейкозами/лимфомами (р <0,05).


Область применения: онкология, иммунология, гематология.
Рекомендации по использованию: результаты исследований могут быть использованы для разработки и совершенствования методов иммунотерапии CD20-позитивных лейкозов и лимфом с применением цитотоксических клеток или химиопрепаратов как при первичном заболевании, так и для лечения химиорезистентных форм и рецидивов.
Предложения по сотрудничеству: консультативная помощь, совместные исследования по изучению противоопухолевого действия антител.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2019 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта