В настоящее время установлено, что эпигенетиче­ская инактивация генов-супрессоров опухоли, обуслов­ленная гиперметилированием промоторной области, яв­ляется таким же характерным признаком опухолей чело­века, как и генетические нарушения, и служит альтерна­тивным механизмом потери функции генов-супрессоров. В ряде исследований было показано, что гиперметилиро­вание генов-супрессоров сопровождает такие опухолевые процессы, как рак предстательной железы, рак печени, рак легкого, рак мочевого пузыря, рак щитовидной желе­зы и злокачественные новообразования некоторых других локализаций. Существуют данные о фактах гиперметили­рования при раке молочной железы (РМЖ). При этом ав­торы в своих исследованиях анализируют от одного до де­сяти различных генов, обладающих различной степенью сопряженности случаев гиперметилирования с заболева­нием. В этой связи актуальным является подбор наиболее чувствительных эпигенетических маркеров для каждой из форм онкологических заболеваний с целью разработки методов ранней диагностики злокачественного процесса.

Цель исследования - провести анализ распространен­ности гиперметилирования промоторных областей 9 раз­личных генов-супрессоров в группах пациенток с узловы­ми образованиями молочной железы, включая РМЖ.

В нашей работе на добровольной основе после под­писания специальной формы письменного согласия при­няли участие 82 пациентки с установленным диагнозом РМЖ и 38 пациенток с различными формами фиброзно-кистозной болезни (доброкачественная патология). Мате­риалом для выделения ДНК служила ткань молочной же­лезы.

В ходе исследования был проведен молекулярно-генетический анализ гиперметилирования промоторных областей 9 генов-супрессоров - RAR?, HIN1, DAPK, RASSF1A, GSTP1, Cyclin D2, APC, p16 и hMLH1 мето­дом полимеразной цепной реакции, специфической к ме­тилированию.

Итоговые значения проведенного анализа представле­ны в табл.

Среди 82 проанализированных образцов опухолевых тканей пациенток с РМЖ метилирование хотя бы по одно­му гену присутствует в подавляющем большинстве слу­чаев. Полностью метилирование отсутствовало лишь в 8 случаях. В то же время, частота метилирования оказалась различной по каждому из 9 анализируемых генов. Наибо­лее метилированной среди 9 генов оказалась промотор­ная область RASSF1A - 76,8% случаев. Также частыми, по нашим данным, являются факты гиперметилирования при РМЖ таких генов, как HIN1, DAPK, APC и Cyclin D2. Единичные случаи метилирования выявлены для генов p16 и hMLH1.

Сравнивая полученные данные по доброкачествен­ной патологии с результатами анализа гиперметилирова­ния этих же генов в группе пациенток с РМЖ, следует от­метить, что по генам RASSF1A и DAPK метилирование в каждой из групп было относительно сходным. В то же время, по таким генам, как RAR?, HIN1, GSTP1, Cyclin D2 и APC гиперметилирование в группе доброкачествен­ной патологии было представлено лишь единичными слу­чаями, а по гену GSTP1 отсутствовало в пределах изучен­ной группы. Метилирование также отсутствовало и у ге­нов p16 и hMLH1.

Одной из исследовательских задач нашей работы яв­ляется оценка анализа гиперметилирования промотор­ных областей генов-супрессоров с точки зрения значимо­сти для диагностики рака молочной железы. Для решения этой задачи необходим подбор наиболее специфических маркеров из числа анализируемых, позволяющих макси­мально снизить процент ложноположительных тестов.

Как видно из данных табл., несмотря на достаточно высокую общую чувствительность анализа, достигаю­щую в группе РМЖ 90,2%, специфичность является невы­сокой. Это заключение сделано на основании того факта, что различие в общем метилировании между группами составило лишь 19,1%. Очевидным в этом случае является то, что максимальный вклад в формирование неспецифи­ческой составляющей тестирования вносят гены RASSF1 и DAPK. Таким образом, они не могут быть использова­ны при создании панели генетических маркеров диагно­стики РМЖ. Также при формировании набора маркеров следует исключить гены p16 и hMLH1, поскольку факты гиперметилирования по ним отмечены в единичных слу­чаях в группе пациенток с диагнозом РМЖ. В результа­те исключения двух генов с низкой чувствительностью и двух низкоспецифичных генов чувствительность тестиро­вания снижается лишь на 10%, в то время как специфич­ность увеличивается значительно. Так, суммарная частота гиперметилирования по пяти генам в группе пациенток с доброкачественной патологией составила 13,2%.

Полученные на данном этапе результаты позволя­ют включить пять из девяти анализируемых нами генов (RAR?, HIN1, GSTP1, Cyclin D2 и APC) в панель генети­ческих маркеров для диагностики рака молочной железы на основе анализа гиперметилирования. Тем не менее, не­обходимо продолжение работы с целью поиска дополни­тельных специфических маркеров для повышения диа­гностической точности данного метода.