Цель работы - изучить влияние фотодинамической терапии с последующим воздействием низкоинтенсивно­го лазерного излучения на репаративные процессы в куль­те поджелудочной железы при резекции органа.

Эксперименты проводили на 10 белых беспородных крысах-самцах, которым выполняли дистальную резек­цию поджелудочной железы по междольковым промежут­кам с сохранением кровоснабжения селезенки (размер ре­зецируемого участка - 1,5 см). Культю железы ушивали двумя П-образными швами (полипропилен 6/0) и погру­жали в брюшную полость. Орошали культю поджелудоч­ной железы 1 мл стерильного водного раствора нильского синего концентрацией 10-6 моль/л. Через 3 мин активиро­вали фотосенсибилизатор, облучая культю железы с помо­щью лазерного аппарата «Родник-1». В качестве источни­ка излучения использовали непрерывный полупроводни­ковый лазер красной области спектра (? = 0,67±0,02 мкм; р = 20 мВт). Операционную рану на передней брюшной стенке послойно ушивали.

В послеоперационном периоде ежедневно в течение 5 дней контактным способом через переднюю брюш­ную стенку выполняли низкоинтенсивное лазерное излу­чение с указанными выше параметрами в области проек­ции культи поджелудочной железы. Животных выводили из эксперимента на 7-е сут после операции.

Электронно-микроскопическое исследование прово­дили в образцах ткани поджелудочной железы, фиксиро­ванных 1%-м раствором четырехокиси осмия на 0,1 М бу­фере Миллонига, рН 7,4 при +4 ?С в течение 2 ч. После дегидратации в спиртах восходящей концентрации и аце­тоне образцы заливали в смесь эпон - аралдит. Из по­лученных блоков на ультрамикротоме МТ-7000 ULTRA (USA) готовили полутонкие срезы, которые окрашивали метиленовым синим. Препараты изучали в световом ми­кроскопе и выбирали участок для дальнейшего изучения ультраструктурных изменений. Затем изготавливали уль­тратонкие срезы, которые контрастировали 2%-м раство­ром уранилацетата на 50%-м метаноле и цитратом свинца по E.S. Reynolds. Препараты изучали в электронном ми­кроскопе JEM-100 CX при увеличениях 4,8-36000 в зоне и вне зоны резекции поджелудочной железы.

В участках поджелудочной железы, расположенных вне зоны резекции, наблюдалась резко выраженная гипер­трофия ацинарных клеток. Центроаци-нозные протоки в большинстве участков органа были суженными. Иногда наблюдалась и другая картина: расширенные протоки, за­полненные секретом. Ядра отличались овальной формой, неглубокими инвагинациями оболочки, мелкозернистым хроматином с формированием крупных гранул возле вну­тренней ядерной мембраны. В ядрах ацинарных клеток отмечалось значительное количество ядрышкового ма­териала. В ацинарных клетках выявлялись многочислен­ные однородные, крупные гранулы зимогена серого цве­та, часто тесно контактировавшие между собой, локали­зовавшиеся большей частью на апикальном полюсе клет­ки. Между гранулами располагались зажатые ими мито­хондрии, отличавшиеся электронно-светлым или умерен­но плотным матриксом и содержащие многочисленные кристы. На базальном полюсе ацинарных клеток реги­стрировалась сильно развитая гранулярная эндоплазмати­ческая сеть, представленная в большей части клеток узки­ми плотноупакованными параллельными мембранами, с большим числом плотно расположенных связанных рибо­сом. Комплекс Гольджи локализовался в надъядерных об­ластях, был представлен преимущественно конденсацион­ными вакуолями и немногочисленными цистернами. Об­наруживались немногочисленные «темные» клетки. Уве­личение числа «темных» клеток в поджелудочной желе­зе наблюдается при ее повышенной функциональной ак­тивности, когда идет стимуляция выброса секрета. «Тем­ные» клетки являются либо резервными, «покоящимися», позже вступающими в фазу синтеза секрета, либо такими, в которых синтез пищеварительных ферментов занимает более длительный срок, либо камбиальными.

В зоне резекции поджелудочной железы в результате воздействия фотодинамической терапии деструктивных процессов не наблюдалось. Отмечали разрастание сое­динительной ткани, богатой коллагеновыми волокнами и бедной клеточными элементами. В большинстве участ­ков органа отмечалась гипертрофия ацинарных клеток и сужение центроацинозных протоков. Ядра большинства клеток имели овальную форму, ядрышки были крупных размеров, располагались эксцентрично, содержали преи­мущественно гранулярный компонент, отличались широ­кими отчетливыми порами в ядерной оболочке. Ядра кле­ток были оттеснены в базальные отделы за счет скопле­ния большого числа секреторных гранул в апикальной и надъядерной зоне. Однородные крупные гранулы зимоге­на были интенсивно серого цвета, часто сливались друг с другом. Между ними находились немного сжатые мито­хондрии и немногочисленные мембраны гранулярной эн­доплазматической сети. Митохондрии базальных отделов цитоплазмы имели матрикс умеренной электронной плот­ности и хорошо выраженные кристы, в апикальных отде­лах наблюдали просветление матрикса и лизис крист. Та­кие изменения структуры митохондрий говорят об их ак­тивной роли как источников энергии в процессах синте­за и созревания гранул. На базальном полюсе ацинарных клеток гранулярная эндоплазматическая сеть была силь­но развита, с многочисленными связанными рибосомами. Комплекс Гольджи существенных отличий в строении от участков железы, расположенных вне зоны резекций, не имел. В цитоплазме выявлялись единичные, мелкие ли­зосомы. В соединительно-тканной прослойке капилляры имели нормопластический вариант строения, наблюда­лась картина усиленного неоангиогенеза.

Таким образом, результаты электронной микроскопии дают возможность утверждать, что применение двухком­понентной лазерной терапии (фотодинамическая терапия с нильским синим + низкоинтенсивное лазерное излуче­ние) в послеоперационном периоде при резекции поджелудочной железы стимулируют репаративные процессы путем ускорения созревания грануляционной ткани, ак­тивизации неоангиогенеза, гипертрофии ацинарных кле­ток, увеличения размеров и количества митохондрий, уси­ления синтеза гранул зимогена. При этом фотодинами­ческая терапия не вызывает деструктивных изменений в участках поджелудочной железы, прилежащих к области резекции.­