Специфическая лабораторная диагностика ротави­русной инфекции в Республике Беларусь уже около 20 лет осуществляется методом ИФА с помощью разрабо­танных нами отечественных препаратов - тест-системы иммуноферментной для выявления антигенов рота­вирусов «РОТА-АГ» и тест-набора конфирматорно­го для подтверждения специфичности выявления анти­генов ротавирусов методом иммуноферментного анали­за «КОНФРОТА-АГ». Эти препараты созданы на основе оригинального эпидемического штамма ротавируса че­ловека с высокой репродуктивной способностью, что по­зволяет получать основные иммунобиологические компо­ненты (антиген, антитела и конъюгат) с выраженной им­мунологической активностью. Препараты обладают вы­сокой специфичностью, чувствительностью и воспроиз­водимостью, они отличаются термостабильностью и име­ют длительный срок годности. Производство этих препа­ратов организовано в РНПЦ эпидемиологии и микробио­логии, они успешно используются во всех специализиро­ванных лабораториях областных центров гигиены, эпиде­миологии и общественного здоровья республики, а также наиболее крупных инфекционных больниц.

Вместе с тем в настоящее время назрела необходимость совершенствования специфической лабораторной диагно­стики ротавирусной инфекции в республике путем прибли­жения ее к местам первичного выявления больных - дет­ским стационарам различного профиля, поликлиникам, ро­дильным домам, учреждениям и бригадам скорой медицин­ской помощи, другим учреждениям здравоохранения го­родского и районного уровня, а также путем сокращения времени исследования.

Этим условиям полностью соответствует иммунохро­матографический метод (ИХМ) выявления антигенов ро­тавирусов в экскретах.

Современный высокотехнологичный с использовани­ем наноматериалов ИХМ является эффективным сред­ством диагностики и позволяет визуально в течение не­скольких минут определить наличие или отсутствие анти­генов, антител, гормонов и других диагностически значи­мых веществ в организме человека, животных, во внеш­ней среде, других объектах исследования. Кроме высокой специфичности и чувствительности к достоинствам ИХМ можно отнести весьма непродолжительное время исследо­вания (5-20 мин) и простоту постановки реакции (не тре­бует специального оборудования и помещений, высоко­квалифицированного персонала). Благодаря этим особен­ностям в последние годы ИХМ и соответствующие диа­гностические наборы получают все большее распростра­нение во всем мире при диагностике кишечных и респи­раторных инфекций, других заболеваний. Вместе с тем, подтверждающий (конфирматорный) тест для этого мето­да и соответствующие наборы не были разработаны, что обусловливало необходимость использования с этой це­лью другого метода исследования, чаще всего ИФА; это в определенной степени нивелировало указанные выше преимущества ИХМ.

Нашей задачей являлась разработка тест-системы для определения антигенов ротавирусов методом иммунохро­матографического анализа с конфирматорным тестом.

Разработанный препарат предназначен для качествен­ного иммунохроматографического определения антиге­нов ротавирусов в биологических субстратах при прове­дении профессиональной специфической лабораторной диагностики ротавирусной инфекции.

В состав тест-системы входят следующие компоненты:

• полимерный флакон для подготовки исследуемой пробы с буферным раствором;

• положительный и отрицательный контроли;

• тест-кассета с реагентами, упакованная в фольгу и снабженная осушителем;

• конфирматорный (содержащий антитела к ротавиру­сам в специально подобранной концентрации) и контроль­ный реагенты для постановки конфирматорного теста;

• буферный раствор для разведения лиофилизирован­ных компонентов;

• инструкция по применению.

Исследование проводится в два этапа: прямой тест (выявляющий антигены ротавирусов) и тест, подтверж­дающий специфичность полученных положительных ре­зультатов.

Прямой тест. Иммунологическая реакция по определе­нию ротавирусного антигена осуществляется на мембра­не с предварительно нанесенными ингредиентами. Мем­брана помещена в кассету (тест-кассета), на которой име­ются окна с зонами внесения исследуемой пробы (П), кон­троля прохождения реакции (К) и учета результатов ре­акции (Р). При наличии ротавирусного антигена в иссле­дуемой пробе он специфически взаимодействует с анти­ротавирусными моноклональными антителами, ковалент­но связанными с красными микросферами. Микросферы с образовавшимся на них иммунным комплексом под дей­ствием капиллярных сил мигрируют по мембране и пере­секают зону Р. В этой зоне имеется поперечная полоска ковалентно связанных с мембраной противоротавирус­ных иммуноглобулинов. Мигрирующий на красных ми­кросферах иммунный комплекс специфически взаимодей­ствует с антителами и останавливается на уровне этой по­лоски. О положительном результате реакции (наличии ан­тигенов ротавирусов в пробе) свидетельствует появление красной полоски в зоне Р. Реакция учитывается при усло­вии прохождения контроля, который проявляется в обра­зовании зеленой полоски в зоне К в течение 10 мин после внесения исследуемой пробы.

Подтверждающий тест. Добавление в положитель­ную на содержание ротавирусного антигена пробу проти­воротавирусных антител в специально подобранной кон­центрации (конфирматорный реагент) приводит к образо­ванию иммунных комплексов и специфическому блокиро­ванию ротавирусного антигена в пробе. Внесение ротави­руссодержащей пробы с добавленным конфирматорным реагентом в окно П не должно приводить к образованию красной полоски в зоне Р. При этом контрольная зеленая полоса должна появляться.

Препарат зарегистрирован в Министерстве здравоох­ранения Республики Беларусь (регистрационное удосто­верение № ИМ-7.95959).