![]() |
УДК: 616.155.392
Год издания: 2010
Использование сегментов гена вариабельного региона тяжелой цепи иммуноглобулинов IgVH у белорусских пациентов с хроническим лимфоцитарным лейкозом
Свирновский А.И., Сергиенко Т.Ф., Судариков А.Б., Бидерман Б.В., Пасюков В.В., Тарас И.Б., Бакун А.В., Дрейчук Н.А., Василевич А.С.
Рубрики: 76.29.33
Республиканский научно-практический центр гематологии и трансфузиологии
Тема НИР: «Лекарственная чувствительность клеток при В-клеточном лимфоцитарном лейкозе в связи с молекулярными маркерами прогноза заболевания»
Сроки выполнения НИР: II кв. 2008 г. — I кв. 2010 г.
Научный руководитель: д-р мед.наук, проф. А.И. Свирновский, канд. биол. наук А.Б. Судариков
Соисполнители: ГУ «Гематологический научный центр Российской академии медицинских наук»
Источник финансирования: Белорусский республиканский фонд фундаментальных исследований
Цель работы - охарактеризовать представление генных сегментов вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина (IgVH) у белорусских пациентов с хроническим лимфоцитарным лейкозом (ХЛЛ).
Исследование клональной перестройки и наиболее часто встречающихся сегментов гена IgVH определяет сущность достижения.
Впервые приведена характеристика субпопуляции белорусских пациентов с ХЛЛ по представлению различных сегментов семейства VH в составе гена IgVH, мутационный статус которого имеет установленное прогностическое значение при этом заболевании.
Исследовали 37 образцов клеток белорусских пациентов с ХЛЛ.
Для определения клональной перестройки генов IgVH кДНК амплифицировали в 6 отдельных реакциях с использованием праймеров, специфичных к VH-семействам, и консенсусного праймера JH. Если с этим набором клональность установить не удавалось, использовали праймеры, рекомендованные BIOMED-2. ПЦР-реакцию проводили в программируемом термостате «Perkin Elmer» в объеме 25 мкл, в составе 3 мкл 5-кратного разведения кДНК, 5 пмоль каждого праймера и смеси для ПЦР (Promega). После первоначальной денатурации (5 мин при 95 ?С) цикл с условиями: 95 ?С - 30 с, 60 ?С - 30 с, 72 ?С - 30 с повторяли 35 раз, после чего следовала 10-минутная элонгация продукта (при 72? С). Клональный продукт очищали в 2% агарозном геле, после чего элюировали с помощью набора Diatom DNA Elution (Биоком, Россия). ПЦР-продукт секвенировали с использованием праймера, специфичного семейству перестроенного VH-гена, или с JHcons с использованием набора Big Dye Terminator на автоматическом секвенаторе ABI PRISM 3100-Avant (Applied Biosystems, Foster City, CA). Полученные последовательности анализировали в базе данных IgBlast.
Частота встречаемости случаев, в которых опухолевый клон состоит из клеток, прошедших стадию соматической гипермутации (M-ХЛЛ) (процент гомологии менее 98%), в белорусской популяции составляла 40,6% (15/37). Количество случаев без мутации (процент гомологии более 98%, Н-ХЛЛ) - 59,4%. Основные закономерности для белорусских пациентов совпадают с тенденциями, отмеченными для пациентов Российской Федерации и Украины. Как в белорусской группе, так и у ближайших соседей (Россия, Украина), а также у пациентов Северной Европы число больных без мутаций больше, чем с мутациями IgVH.
Одновременно важно подчеркнуть, что идентификация определенных сегментов VH в перестроенном гене опухолевого иммуноглобулина имеет значение для субпопуляционной характеристики заболеваемости ХЛЛ в различных регионах, не говоря уже о возможности ее использования как маркера прогноза течения заболевания.
В клетках белорусских пациентов наиболее часто встречались сегменты VH1-69 (19%), VH3-30 (11%), сегменты VH1-2, VH3-23, VH3-9, VH3-11 использовались с одинаковой частотой (8%). Наиболее близкой по распределению сегментов является российская и украинская субпопуляция. Аналогичное распределение пациентов характерно для Северной Европы, однако ген VH1-69 там встречается реже (12 против 19%). В то же время в Европе очень распространен ген VH3-21 (11%), который практически отсутствует в российской и белорусской субпопуляциях пациентов (таблица)
В странах Западной Европы, в Иране, напротив, преобладают больные с мутациями в генах IgVH (50-69%) по сравнению с числом больных без мутаций (31-50%). Но если в Западной Европе распределение наиболее часто встречающихся генов вариабельного региона IgVH близко к североевропейскому и российско-белорусскому, то в Иране преобладает использование VH-генов 3-7 и 3-48. В субпопуляции пациентов ХЛЛ Китая также выражено преобладание случаев с мутацией (69,2%), однако сегменты VH1-69 и VH3-21 не представлены в данной субпопуляции. Таким образом, согласно полученным нами данным, белорусская субпопуляция по исследованным показателям ближе к российской, украинской и североевропейской.
Таким образом, частота встречаемости семейств генов IgVH указывает на отличия ограниченной белорусской субпопуляции пациентов с ХЛЛ от пациентов стран Западной Европы и Востока, свидетельствуя о возможных различиях этнических факторов или факторов окружающей среды, участвующих в развитии ХЛЛ.
Область применения: онкогематология, молекулярная биология
Рекомендации по использованию: внедрение методологии и результатов в клиническую практику для использования полученных данных при терапии пациентов с ХЛЛ
Предложения по сотрудничеству: проведение совместных молекулярно-биологических исследований для расширения используемых молекулярно-генетических прогностических факторов при лечении ХЛЛ