Исследование предпринято для разработки оптималь­ного и воспроизводимого метода получения in vitro ден­дритных клеток (ДК) из продукта лейкафереза пациен­тов с онкологическими заболеваниями и выбора источни­ка ДК для получения противоопухолевой вакцины. Изу­чено генерирование ДК из двух источников: CD34+-ДК, полученные в результате культивирования CD34+-клеток-предшественников и моноцитарные ДК (МоДК), получен­ные при культивировании моноцитов, выделенные из про­дукта лейкафереза 10 пациентов с онкологическими за­болеваниями. Дифференцировка МоДК осуществлялась в присутствии цитокинов - ГМ-КСФ и ИЛ-4 в течение 7 дней с последующим добавлением коктейля провоспа­лительных цитокинов: ФНО-?, ИЛ-1?, ПГE2 , ИЛ-6 для созревания ДК. Для получения СD34+-ДК гемопоэтиче­ские стволовые клетки выделяли методом иммуномагнит­ной селекции с последующей экспансией в присутствии цитокинов: SCF и Flt-3L и дифференцировкой в ДК пу­тем добавления ГМ-КСФ и ФНО-?. Для созревания ДК использовали липополисахарид. По окончании каждого этапа культивирования подсчитывали клетки с оценкой их жизнеспособности с красителем трипановым синим и изучали иммунофенотип на проточном цитофлуориме­тре FACSCan («Becton Dickinson», США) c использовани­ем специфических моноклональных антител к CD14, HLA DR, CD80, CD86, CD11c, CD11a, CCR7, CD83, CD209 и изотипического контроля.

Получение достаточного количества функционально активных незрелых ДК является основным условием для создания противоопухолевой вакцины на основе ДК, так как только незрелые ДК способны «утилизировать» ан­тиген. Анализ экспрессии маркеров незрелых ДК CD86 и HLA-DR показал, что незрелых ДК значительно больше, когда их предшественниками являются моноциты. Значи­тельная часть CD34+ клеток (43 (41-45)%) экспрессиру­ет CD14 антиген при дифференцировке в ДК, т. е. перво­начально направленно дифференцируется в моноциты и лишь потом в ДК. Оценка количественного выхода незре­лых ДК из 20 мл продукта лейкафереза показала, что из фракции моноцитов можно получить 3,6 (0,4-7,92)?107 незрелых ДК, что достоверно больше, чем из фракции CD34+ клеток - 0,8 (0,32-14,8)?107. Относительное со­держание клеток промежуточной степени зрелости, экс­прессирующих CD1а антиген, зрелых ДК, экспрессирую­щих на своей поверхности антигены CD83, также значи­тельно больше, когда предшественниками являются моно­циты по сравнению с CD34+ клетками (р <0,05). Маркер зрелых ДК CD83+CD209+ экспрессировали 87,1±6,3% клеток, полученных из моноцитов, и только 5±1,4% кле­ток, полученных из CD34+ клеток.

Результаты нашей работы свидетельствуют о том, что при получении незрелых и зрелых ДК из различных клеток-предшественников, содержащихся в одном про­дукте лейкафереза пациента, количественный выход ДК различной степени зрелости из фракции моноцитов до­стоверно выше, чем из фракции CD34+ клеток.

В Беларуси это первый подход к созданию индивиду­альной противоопухолевой вакцины на основе дендрит­ных клеток, полученных из продукта лейкафереза, для ле­чения солидных опухолей.