Одним из новых перспективных подходов к терапии множественно лекарственно-устойчивого туберкулеза (МЛУ-ТБ) является использование антигенспецифических дендритных клеток (ДК). Роль ДК состоит в поглощении чужеродного агента, его процессинге и представлении в лимфоидных органах Т-лимфоцитам, что приводит к ак­тивации и пролиферации антигенспецифических Т-клеток. Дисфункция ДК при туберкулезе может быть обусловлена непосредственным действием микобактерий и их антиге­нов на клетки, дисбалансом продукции цитокинов и др.

Цель исследования: разработка и оценка клинико-лабораторной эффективности нового метода клеточной аутоиммунотерапии пациентов с МЛУ-ТБ с использо­ванием аутологичных моноцитарных ДК.

Для получения мДК моноциты перифериче­ской крови культивировали в среде с ГМ-КСФ и ИЛ-4. ДК праймировали лизатом аутоштамма МБТ и культивировали в среде с ГМ-КСФ, ИЛ-4, ФНО-? и дибутирил-цАМФ для созревания ДК. Культуры мДК были исследованы на иммунофенотип и стерильность и вводились трехкратно внутрикожно с интервалом в 2-3 недели. Протокол клинических испытаний метода имму­нотерапии был утвержден Министерством здравоохране­ния РБ. В основную группу включали пациентов, давших информированное согласие после ознакомления с инфор­мацией о методе и беседы с врачом-исследователем. Все пациенты основной группы хорошо переносили инъек­ции аутологичных мДК.

В клиническое испытание было включено 26 пациен­тов с МЛУ-ТБ (основная группа - 13 человек: 12 мужчин и 1 женщина в возрасте 23-52 года; группа сравнения - 13 человек, аналогичных по полу, возрасту и структуре клинических форм). Среди лиц, включенных в испыта­ния, было 3 пациента с впервые выявленным МЛУ-ТБ, 6 - с рецидивом заболевания, 1 - с неудачей в лечении, 3 - с хроническим течением ТБ. В структуре клиниче­ских форм в обеих группах преобладал инфильтративный туберкулез легких в фазе распада и обсеменения.

В ходе испытаний проводили мониторинг клинико-рентгенологических и лабораторных показателей. Им­мунофенотипирование лимфоцитов крови выполняли по общепринятой методике с использованием проточ­ной цитофлюориметрии. Определяли внутриклеточ­ную продукцию цитокинов ФНО-?, ИФН-?, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-17, индуцированную ФМА.

У пациентов основной группы и группы сравнения в начале лечения отмечался резко выраженный дисбаланс внутриклеточной продукции цитокинов при угнетении Т-клеточного иммунитета: значимо усилена продукция ИФН-? и ИЛ-17 в сравнении с группой здоровых лиц (Р<0,001) при угнетении синтеза ФНО-? (р<0,001) и ИЛ-4; увеличено содержание CD8⁺ и снижено соотношение СD4/СD8 (р<0,001); повышено количество Т-лимфоцитов активированных/регуляторных (СD4⁺ СD25⁺) (р<0,001) и значительно снижена доля СD28⁺ лимфоцитов (р<0,01).

В группе пациентов, получавших комплексную хи­миотерапию и мДК, в 69,23±12,8% наблюдений (9 че­ловек) отмечалась положительная рентгенологическая динамика и снижение интенсивности бактериовыде­ления. Среди пациентов группы сравнения только у 30,76±12,8% имела место положительная рентгеноло­гическая динамика, а подавление интенсивности бакте­риовыделения наблюдалось у 5 из 13 (38,5%).

В обеих группах через 2-2,5 мес. лечения отме­чалось некоторое увеличение активности ферментов аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансфера­зы, однако в процессе стандартной химиотерапии оно было более выражено (50,0 и 21,4% соответственно).

В процессе лечения пациентов с применением мДК от­мечалась некоторая тенденция к увеличению содержания CD4⁺ клеток (76,9% случаев), к снижению CD8⁺ клеток (76,9%) и росту соотношения CD4/CD8 (84,6%); отмеча­лось достоверное увеличение активированных/регулятор­ных Т-лимфоцитов CD4⁺CD25⁺ с 6,47±0,45 до 8,31±0,367% (р<0,01). В процессе стандартной химиотерапии лиц, стра­дающих МЛУ-ТБ значительных различий среднегруппо­вых значений этих показателей не наблюдалось.

Установлено достоверное увеличение относитель­ного числа продуцирующих ИНФ-? лимфоцитов у па­циентов с МЛУ-ТБ до и после лечения по сравнению с контролем (P<0,05). У пациентов группы сравнения вы­явлено достоверное снижение пула ИНФ-?⁺ лимфоцитов в периферической крови (p<0,05).В опытной группе по­сле курса иммунотерапии количество ИНФ-?⁺ клеток до­стоверно не отличалось от показателей до терапии (хотя и имело некоторую тенденцию к снижению), что, веро­ятно, свидетельствует об отсутствии иммуносупрессии Т-клеток. После терапии мДК отмечалось увеличение пула ИЛ-17⁺ лимфоцитов по сравнению с группой до­бровольцев (р<0,05), однако не выявлено различий меж­ду изученым показателем до и после терапии.

В группе сравнения после стандартной терапии про­исходило уменьшение фракции ИЛ-17-продуцирующих клеток в сравнении с группой добровольцев (р<0,05). После терапии у пациентов основной группы досто­верно снизилось количество ИЛ-4-продуцирующих клеток, что в совокупности с отсутствием существен­ной динамики изначально повышенного числа ИНФ-?⁺ клеток может указывать на активацию CD4⁺ Th1 зави­симого иммунного ответа (р<0,05).

Таким образом, применение мДК способствовало более частому снижению массивности бактериовы­деления, более частой положительной рентгенологи­ческой динамике, нормализации уровня иммуногло­булинов класса А и М у половины пациентов, более частому увеличению числа Т-хелперов (СD4⁺, р<0,05), увеличению иммунорегуляторного индекса (р<0,05), числа активированных/регуляторных Т-лимфоцитов (СD4⁺ СD25⁺) (р<0,01), повышению экспрессии СD28⁺ лимфоцитов, снижению экспрессии молекулы СD95⁺ и активации Тх1 - иммунного ответа (р<0,05).

Полученные данные позволяют рассматривать им­мунотерапию мДК как новый эффективный метод па­тогенетической терапии пациентов с туберкулезом лег­ких с множественной лекарственной устойчивостью.