УДК: 616.995.11+593.1]: 544.723
Год издания: 2011
Сорбционный метод обнаружения яиц гельминтов и цист простейших в копроматериале
Скрипова Л.В.
Рубрики: 76.03.45
Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: «Разработать метод обнаружения возбудителей кишечных паразитарных болезней на основе адсорбции и создать диагностический набор»
Сроки выполнения НИР: январь 2009 г. — декабрь 2010 г.
Научный руководитель: д-р биол. наук Л.В. Скрипова
Источник финансирования: госбюджет
В связи с тем, что подавляющее большинство гельминтов и простейших в половозрелой стадии у человека обитает в желудочно-кишечном тракте или связанных с ним органах (печень, желчный пузырь, поджелудочная железа), наиболее распространенными при диагностике являются копрологические методы исследования.
Непременным условием полноценной лабораторной диагностики паразитарных болезней является высокий уровень методики исполнения исследований. Он может быть достигнут при выполнении текущей нагрузки с помощью чувствительной, малозатратной по времени и экономически эффективной методики на уровне современных научных знаний и доступных для лабораторий широкой сети.
В настоящее время в мире становятся популярны методы адсорбции. Задача авторов - разработать сорбционный метод обнаружения возбудителей кишечных паразитарных болезней.
При разработке технологии пробоподготовки были учтены, входящие в состав копроматериала физические элементы (консистенция, рН, жиры, кислоты, ферменты, слизь, мышечные волокона, растительная клетчатка, эпителиальные клетки), которые способствуют сокрытию яиц гельминтов, цист простейших. С учетом многих факторов, присущих исследуемому материалу, экспериментально были подобраны химические реагенты. Работа проводилась с использованием культуры яиц аскарид и цист лямблий.
Изучив состав копроматериала и воздействие сорбирующей смеси на его среду, для отделения яиц гельминтов и цист простейших, соответствующих удельному весу основных возбудителей, рассчитано количественное соотношение его к нейтральной воде (рН-7,6).
Было установлено, что коагулянты в количестве 0,2 г в отдельности флотируют до 84-86% возбудителей с плотностью от 1,0 до 1,14. В дальнейшем для усиления адсорбции, в смесь коагулянтов был введен сорбент. При смешивании коагулянтов и предложенного сорбента увеличилось улавливание яиц аскарид и цист лямблий до 96%.
Проведен поиск оптимальных объемов объектов исследования. За основу были взяты: искусственно обсемененные яйцами аскарид и цистами лямблий копроматериал и дистиллированная вода. Готовили суспензию, доводя до гомогенной массы. В дальнейшем для выделения патогенов вносили в суспензию сорбирующую смесь. Исследования показали, что количество используемой воды и смеси реагентов во всех трех случаях, не зависимо от объема исследуемого материала адсорбировала от 88 до 94% экземпляров возбудителей.
Высокая эффективность обнаружения установлена при условии, если в состав суспензии будет входить определенное количество копроматериала, воды и смеси реагентов. Было показано, что объем материала и предложенное количество химических реагентов оказывает существенное влияние на отделение возбудителей.
В результате проведенных экспериментальных исследований с использованием химических реагентов и культуры возбудителей была отработана технология пробоподготовки копроматериала для отделения яиц гельминтов и цист простейших. Проведен подбор химических реагентов для подготовки копроматериала к взаимодействию и механизмам задержки возбудителей группы кишечных паразитарных заболеваний.
На основе современной технологии пробоподготовки копроматериала к исследованию с использованием сорбентов разработан метод одновременного обнаружения яиц трематод, нематод, цист, ооцист простейших и создан диагностический набор.
Разработанный метод позволяет получать качественные результаты обследования населения с целью выявления кишечных гельминтозов и протозойных заболеваний в короткие сроки (до 10 мин), с минимальными затратами на имеющемся в лабораториях оборудовании. Стоимость одновременного обнаружения нескольких (до 8) видов возбудителей в 12 раз ниже импортного - 0,2 доллара США.
Таким образом, экспериментально отработанная технология позволила разработать эффективный до 96% метод обнаружения яиц гельминтов и цист простейших в копроматериале.