УДК: 578.825.11-085:[615.015:281.8]:57.063.8(476)
Год издания: 2011

Выделение ацикловиррезистентных штаммов вирусов герпеса, циркулирующих на территории Республики Беларусь

Полещук Н.Н.Бореко Е.И.Рубаник Л.В.Савинова О.В.
Рубрики: 34.25.0034.25.39
Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: «Разработать систему мониторинга лекарственной устойчивости герпесвирусов и создать тест-систему для их идентификации»
Сроки выполнения НИР: 01.01.2011 г. — 31.12.2016 г.
Научный руководитель: д-р мед. наук, проф. Н.Н. Полещук, д-р мед. наук Е.И. Бореко
Источник финансирования: госбюджет

Цель исследования: выделение и изучение феноти­пической чувствительности штаммов вируса простого герпеса к ацикловиру.

Исследования проведены на клиническом и экс­периментальном материале. Обследовано 79 пациен­тов с урогенитальной патологией. Из них отобрано 23 человека (17 женщин и 6 мужчин) с репродуктивны­ми нарушениями (бесплодие - 16, неразвивающаяся беременность - 3, самопроизвольный выкидыш - 4). В анамнезе у части пациентов 12 из 23 (52,17%) были неоднократные эпизоды герпетических высыпаний. Большинство (19 из 23 - 82,6%) сообщало о ранее подтвержденном лабораторном диагнозе «герпетиче­ская инфекция» и прохождении неоднократных курсов противогерпетической терапии.

Всем пациентам проведено комплексное лабора­торное исследование клинического материала (мазков-соскобов из урогенитального тракта, сыворотки крови) с использованием культурального метода, метода флу­оресцирующих антител (МФА), иммуноферментного анализа (ИФА), полимеразной цепной реакции (ПЦР).

При исследовании соскобного материала в 20 из 23 проб (86,96%) на культуре клеток установлено харак­терное для герпесвирусов цитопатическое действие (гигантские клетки с крупным ядром, вакуолизация цитоплазмы, слияние клеток с образованием синцития и др.). При обработке культуры клеток флуоресцирую­щими противогерпетическими антителами наблюда­лось специфическое свечение вирусных антигенов - от очагов в форме глыбок в ядрах и околоядерной цитоплазме до диффузного свечения всей зараженной клетки. ДНК вируса герпеса простого и ДНК цитомега­ловируса определена методом ПЦР у 14 из 23 (60,87%) и у 3 из 23 (13,04%) пациентов соответственно.

Методом ИФА в сыворотке крови у 16 из 23 (69,57%) обследуемых выявлены противогерпетиче­ские IgM, причем у 11 (47,83%) - IgM к вирусу герпе­са простого и у 4 (17,39%) - IgM к цитомегаловирусу, у 2 (8,7%) - IgM к вирусу герпеса простого и цитоме­галовирусу одновременно.

В результате выделено три изолята вируса герпеса простого и проведено сравнительное изучение их био­логических свойств. Репродуктивная активность изо­лятов варьировала от 4,5 до 5,25 ТЦД50/мл, уровень экспрессии вирусных антигенов (интенсивность све­чения) колебался от 3+ до 4+. С помощью электрон­ной микроскопии у 2 изолятов вируса герпеса изуче­ны основные стадии морфогенеза и ультраструктура. Ультраструктурный анализ показал сохранность всех этапов морфогенеза: формирование внутриядерных нуклеокапсидов, почкование на ядерных мембранах и выход «зрелых» сформированных вирусных частиц во внеклеточное пространство путем цитолиза. Размер нуклеокапсида составлял 80 - 110 нм, зрелого вирио­на - 200-240 нм.

Выделенные изоляты адаптированы к клеточной линии МсСоу и RD и накоплены для изучения in vitro фенотипической чувствительности к ацикловиру. Определение фенотипической чувствительности изо­лятов проводили, исследуя противовирусное действие различных концентраций ацикловира и вычисляя кон­центрации препарата, подавляющие размножение ви­руса на 50% (ЕС50) и концентрации ацикловира, пода­вляющие размножение вируса на 90% (ЕС90). Для этого прежде всего, были изучены противовирусные свой­ства трех лекарственных форм ацикловира (препарат А, препарат В, препарат С) в отношении лабораторного вируса герпеса I типа (штамм 1 С). При этом установ­лено более чем десятикратное различие в значениях ЕС50. Показано, что наиболее активным был препарат А. In vitro действие данного препарата в отношении выделенных изолятов вируса герпеса вызывает сниже­ние чувствительности изолятов от пациента П. в срав­нении с чувствительностью лабораторного штамма ви­руса (ЕС50 и ЕС90 ниже в 44 и 32 раза соответственно), от пациентки Р. (ЕС50 и ЕС90 ниже в 268 и 106 раз со­ответственно). Изолят от пациента Д. был полностью резистентен к действию ацикловира (препарата А) во всем диапазоне исследованных концентраций, начиная с 800 мкг/мл.

Полученные данные свидетельствуют о штаммовых различиях вируса простого герпеса и различной чув­ствительности их к ацикловиру. На территории Респу­блики Беларусь циркулируют штаммы вируса герпеса частично или полностью устойчивые к ацикловиру, что указывает на необходимость разработки доступных ме­тодик и тест-систем, определяющих как фенотипиче­скую, так и генотипическую резистентность вирусов герпеса к препарату.


Область применения: вирусология, лабораторная диагностика.
Рекомендации по использованию: результаты работы могут быть внедрены в практическое здравоохранение для выделения и определения чувствительности изолятов к ацикловиру при тяжелых генерализованных формах герпетической инфекции.
Предложения по сотрудничеству: совместные исследования по указанной тематике.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2019 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта