УДК: 578:[616.832.9+618.8]-097.3-07
Год издания: 2011

Разработка диагностической иммуноферментной тест-системы для выявления антител к вирусу лимфоцитарного хориоменингита

Фомина Е.Г.Счесленок Е.П.Школина Т.В.Владыко А.С.
Рубрики: 76.03.41
Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: «разработать рекомбинантную иммуноферментную тест-систему для выявления суммарных антител (IgM и IgG) к вирусу лимфоцитарного хориоменингита (ЛХМ)»
Сроки выполнения НИР: январь 2009 г. — декабрь 2010 г.
Научный руководитель: д-р мед. наук, проф. А.С. Владыко
Источник финансирования: госбюджет

Лимфоцитарный хориоменингит - острое инфекци­онное заболевание, сопровождающееся поражением моз­говых оболочек и ЦНС. Этиологическим агентом данного заболевания является представитель семейства аренавиру­сов (Arenaviridae), выделенный Armstrong C. и Lillie R.D. в 1934 г. при изучении вируса энцефалита Сан-Луи. Основ­ным природным резервуаром вируса ЛХМ являются гры­зуны. Заражение человека происходит обычно вследствие употребления пищевых продуктов, загрязненных выделе­ниями мышей. Возможно заражение через дыхательные пути, а также трансплацентарно. В литературе описаны случаи заражения вирусом ЛХМ при пересадке органов.

Для серодиагностики данного заболевания во всем мире используются диагностические тест-системы на основе рекомбинантных полипептидов, содержащих антиген-значимые участки вирусных белков. В Респу­блике Беларусь и в странах ближнего зарубежья такие тест-системы не производятся.

Таким образом, для оценки эпидемиологической си­туации и анализа острых случаев заболеваний ЛХМ на­селения Беларуси необходимо разработать и внедрить рекомбинантную иммуноферментную тест-систему для выявления суммарных антител к вирусу ЛХМ, что и является целью данного исследования.

В качестве антигена в разработанной тест-системе использован рекомбинантный полипептид, содержа­щий антигенные детерминанты нуклеокапсидного белка вируса лимфоцитарного хориоменингита. Мак­симальный выход рекомбинантного полипептида на­блюдался при концентрации индуктора (IPTG) в среде 0,4 mМ, время индукции составило 3 часа. Отработаны условия очистки полипептида с помощью аффинной металлохелатной хроматографии. Все стадии хромато­графии: связывания, отмывки и элюции рекомбинант­ных полипептидов были выполнены в присутствии денатурирующего агента - 6 М мочевины.

Рекомбинантный полипептид накоплен в коли­честве 1200 мкг. Данный полипептид использован в качестве антигена, сорбированного на поверхности 96-луночной панели для проведения ТИФА. Показана высокая антигенная активность полученного рекомби­нантного полипептида. На основе данного полипептида укомплектована рекомбинантная иммунофермент­ная тест-система для выявления суммарных антител (Ig M и G) к вирусу ЛХМ. Определена диагностическая чувствительность и специфичность тест-системы, ко­торая составила 100 и 95,65%, соответственно.

По результатам медицинских испытаний получены акты и протоколы, согласно которым «Тест-система ре­комбинантная для выявления суммарных антител (IgM и IgG) к вирусу лимфоцитарного хориоменингита методом иммуноферментного анализа», «Белар-ЛХМ-АТ» может быть рекомендована для применения в медицинской практике. Получено регистрационное удостоверение № ИМ-7.97172 на производство данной тест-системы.

Полученная рекомбинантная тест-система может быть использована не только для анализа эпидемиологи­ческой ситуации в республике по учету серопозитивной прослойки населения к вирусу, но и выявления острых случаев вирусного лимфоцитарного хориоменингита.


Область применения: лабораторная диагностика вирусных инфекций, анализ эпидситуации.
Рекомендации по использованию: тест-система может быть использована для выявления суммарных антител (острых и хронических случаев) к вирусу лимфоцитарного хориоменингита.
Предложения по сотрудничеству: использование тест-системы в практике здравоохранения: республиканским, Минским городским и областными центрами гигиены и общественного здоровья; учреждениями здравоохранения инфекционного профиля.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2019 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта