Повышение качества иммунобиологических ле­карственных средств и диагностических стандартов, получаемых из крови иммунных («Плазма человека антистафилококковая» и «Иммуноглобулин челове­ка антистафилококковый») и изоиммунных доноров («Иммуноглобулин человека антирезус анти-D» и диа­гностических сывороток антирезус) является важной социальной и экономической задачей. Увеличение объемов выпуска данных иммунобиологических ле­карственных средств и лабораторных диагностикумов необходимо для клинико-лабораторных целей и улуч­шения результатов лечения пациентов со стафилокок­ковой инфекцией, а также в акушерской практике для профилактики резус-конфликтных беременностей. Их качество и объемы выпуска зависят от содержания специфических антител (анти-α-стафилолизина, анти­тел к резус-D антигену эритроцитов) в крови доноров.

Цель исследования: повышение качества иммунных препаратов, выпускаемых службой крови Республики Беларусь, путем применения для иммунизации доно­ров антигенов в сочетании с иммуномодулирующими препаратами.

В рамках данной НИР впервые разработаны 2 спосо­ба иммунизации доноров антигенами с использовани­ем в качестве иммуномодуляторов цитокинов. Оценку безопасности и эффективности предложенных спосо­бов иммунизации проводили в рамках клинических испытаний по протоколу открытого рандомизирован­ного контролируемого проспективного исследования в параллельных группах доноров с активным контро­лем. В исследование было включено 60 иммунных и 30 изоиммунных доноров-добровольцев мужского пола в возрасте 20-50 лет. Наблюдение за состоянием доноров и контроль клинико-лабораторных показателей прово­дили до иммунизации и через каждые 2 недели после начала иммунизации доноров в течение 3-4 мес.

Cтатистический анализ полученных результатов осуществляли с использованием пакета программ «Microsoft Excel», «Statistika 6». Статистически зна­чимые различия между сравниваемыми показателями определяли с помощью однофакторного дисперсион­ного анализа с последующими попарными сравне­ниями по критерию Ньюмена-Кейлса при выявлении отличий между исследуемыми группами. Для опти­мального представления о центральной тенденции, ширине и ассимметрии показатели длительности поддержания титров у доноров после иммунизации представлены в виде Ме (Q25,Q75), где Me - медиа­на, Q25 - нижний квартиль (25%), Q75 - верхний квартиль (75%). Различия считали статистически зна­чимыми при P<0,05.

Для получения иммунной плазмы предложена со­кращенная схема иммунизации доноров, предусматри­вающая двукратное введение адсорбированного стафи­лококкового анатоксина с интервалом в 7 дней (вместо трехкратного по стандартной схеме) и дополнительное введение препаратов рекомбинантных цитокинов: ин­терлейкина-2 или интерферона-α подкожно через 30 мин после первого введения антигена. Установлено, что в период с 4-й по 11-ю недели после начала цик­ла иммунизации однократное введение донорам, им­мунизированным адсорбированным стафилококко­вым анатоксином, рекомбинантного интерлейкина-2 способствовало повышению в периферической крови специфической активности анти-α-стафилолизина в 1,8-2,1 раза по сравнению со стандартной схемой им­мунизации (P<0,05).

За период наблюдения с 2008 г. по 2011 г. выяв­лено, что иммунизация доноров по разработанным схемам с использованием интерлейкина-2 («Рон­колейкин», «Биотех», Российская Федерация) или интерферона-α («Эберон альфа Р», «Heber Biotec», Куба) способствует продлению срока выявления у иммунных доноров повышенной специфической ак­тивности анти-α-стафилолизина (не менее 2 МЕ/мл) с Me=4,7 (Q25=2,1;Q75=6,1) мес. (контроль) до Ме=6,7 (Q25=3,4;Q75=9,4) мес. (Р=0,035) и Ме=6,0 (Q25=3,8;Q75=8,6) мес. (Р=0,071) соответственно по сравнению с контролем.

Для получения изоиммунной плазмы предложе­на новая схема реиммунизации доноров, предусма­тривающая сокращение количества инъекций резус-положительных аллогенных донорских эритроцитов до 1 раза (вместо 3) и дополнительное введение пре­паратов цитокинов подкожно через 30 минут после первого введения антигена. Однократное введение до­норам резус-положительных аллогенных эритроцитов и интерлейкина-2 в период со 2-й по 15-ю недели на­блюдения после начала реиммунизации сопровожда­лось статистически значимым повышением в 2,5-3,1 раза титров антител класса IgG к D антигену, а под дей­ствием интерферона-α- в 1,3-1,9 раза по сравнению со стандартной схемой реиммунизации.

За период наблюдения с 2008 по 2011 гг. выявлено, что реиммунизация доноров по разработанной сокра­щенной схеме повышает период обнаружения титров антител к резус-D антигену не менее 1:64 с Ме=8,3 (Q25=4,0;Q75=14,2) мес. (контроль) до Ме=14,1 (Q25=10,8;Q75=19,1) мес. (Р=0,053) (с применением интерлейкина-2) и Ме=10,3 (Q25=7,6;Q75=15,6) мес. (Р=0,303) (с применением интерферона-α). Безопас­ность использования для иммунизации доноров дан­ных цитокинов подтверждена отсутствием у них откло­нений в состоянии здоровья по данным физикального обследования, а также общего анализа крови с лейко­цитарной формулой, биохимического анализа крови, содержания в сыворотке крови доноров эндогенных цитокинов интерлейкина-2 и интерферона-α.

Использование данных схем иммунизации (реим­мунизации) доноров позволяет получить значительный экономический эффект: при включении в сокращенную схему иммунизации интерлейкина-2 себестоимость им­мунной плазмы снижается на 48,8%, а при применении интерферона-α - на 26,6% по сравнению со стандартной схемой иммунизации. При включении в сокращенную схему реиммунизации доноров резус-положительными аллогенными эритроцитами интерлейкина-2 себестои­мость изоиммунной плазмы снижается на 59,3%, а при применении интерферона-α - на 33,7% по сравнению со стандартной схемой реиммунизации.

Таким образом, применение предложенных схем иммунизации и реиммунизации доноров с использо­ванием цитокинов способствует снижению антиген­ной нагрузки на организм доноров, повышению у них титров специфических антител, более длительному поддержанию их высокого уровня в крови и, следова­тельно, сокращению числа иммунизируемых доноров и себестоимости иммунной и изоиммунной плазмы.

Вид патентной защиты: получено решение Евра­зийского патентного ведомства о выдаче евразийского патента по заявке на изобретение «Способ получения антистафилококковой плазмы крови» (№ 200900884 от 12.05.2009) и уведомление о положительном резуль­тате формальной эксперизы Евразийского патентного ведомства по заявке «Способ получения изоиммунной плазмы крови» (№ 200901262 от 04.08.2009), авторы заявок на патенты: д-р мед. наук, проф. М.П. Потапнев, Ж.В. Пешняк, Л.М. Мальцева, М.Н. Смирнов (ООО «Биотех», Российская Федерация).