На сегодняшний день FoxP3 является наиболее специфичной маркерной молекулой для идентификации регуляторных CD4⁺CD25⁺ T-клеток (T_reg). Тем не менее, опубликованы свидетельства того, что его экспрессия может обнаруживаться в эффекторных Т-лимфоцитах, не обладающих супрессорной активностью. Напротив, обнаружены лимфоциты, которые способны к иммуно­супрессорному действию, несмотря на отсутствие экс­прессии FoxP3. Были предложены и другие маркеры, которые позволили бы выделить регуляторные Т-клетки среди гетерогенной популяции CD4⁺CD25⁺ лимфо­цитов, такие как CD127^-, CD62L⁺ и др. Показано, что CD127 (рецептор к ИЛ-7) экспрессируется преимуще­ственно на активированных CD4⁺ Т-клетках человека, в то время как CD127^low/negCD4⁺ клетки характеризуют­ся выраженной супрессорной активностью и являются FoxP3-позитивными независимо от уровня экспрессии CD25. CD4⁺CD25+FoxP3⁺ T^reg-клетки, экспрессирующие CD62L (L-селектин), также обладают более выраженной супрессорной активностью по сравнению с популяци­ей CD62L- T^reg-клеток. Однако до сих пор остается не­ясным, какая совокупность фенотипических маркеров наиболее адекватно описывает функциональную попу­ляцию Т-лимфоцитов человека, обладающих иммуносу­прессорными свойствами in vitro и in vivo.

Цель исследования: выявление иммунофенотипа T_reg-лимфоцитов, который бы наиболее полно отражал регуляторный потенциал клетки.

Объектом исследования являлись мононуклеарные клетки (МНК) периферической крови, полученные от 32 здоровых доноров. МНК выделяли из перифериче­ской крови на градиенте плотности при 400g 30 минут, дважды отмывали в культуральной среде.

Метод проточной цитофлуориметрии, флуоресцентно-активированная клеточная сортировка, метод полимеразной цепной реакции с обратной транс­крипцией (ОТ-ПЦР).

На первом этапе работы была проанализирована экспрессия FoxP3 на различных по степени экспрессии CD25 субпопуляциях CD4⁺ Т-лимфоцитов - CD25^neg (CD25-негативные), CD25^low (низкая/средняя экс­прессия) и CD25^hi (высокая экспрессия). Количество активированных/регуляторных CD4⁺CD25⁺ Т-клеток у здоровых доноров среди МНК составило 4,8% (ме­диана; диапазон 3,3-13,3%), однако содержание по­тенциальных CD4⁺ T_reg-клеток ниже: 1,3% CD4⁺CD25^hi и 1,3% CD4⁺FoxP3⁺ (0,6-2,1 и 0,5-3,2%, соответствен­но; P<0,01). Аналогично, среди CD4⁺ Т-лимфоцитов доля CD25^hi и FoxP3⁺ соответственно составила 4,3% (1,8-7,8%) и 3,9% (1,4-7,4%), что существенно ниже содержания CD25⁺ (22,5%; 9,1-43,6%; P<0,01). Также прослеживалась четкая связь между уровнем экспрес­сии CD25 и FoxP3: доля FoxP3⁺ была значительно и до­стоверно выше среди CD25^hi Т-лимфоцитов (40,1%) по сравнению с CD25^neg (1,4%; P < 0,01) и CD25^low клетка­ми (7,6%; P<0,01). В то же время корреляция между со­держанием CD25^hi и FoxP3⁺ Т-лимфоцитов не выявле­на. Последующее сравнение абсолютного содержания FoxP3+ клеток среди субпопуляций CD4⁺ лимфоцитов, различающихся по экспрессии CD25, не выявило до­стоверных различий. Значительная часть FoxP3⁺ T_reg-клеток относилась к негативным по CD25. Таким об­разом, определение общего содержания CD4⁺CD25⁺ Т-лимфоцитов не отражает истинного количества CD4⁺ T_reg-клеток, что необходимо учитывать при анализе им­мунограммы.

Чтобы выяснить возможность использования CD127^- и CD62L⁺ в качестве маркера FoxP3⁺ T_reg-клеток человека, был проведен корреляционный анализ количества CD4⁺ с фенотипом CD25⁺CD127^-/CD25⁺CD62L⁺ и FoxP3-экспрессирующих клеток (CD25⁺FoxP3⁺ либо FoxP3⁺). Достоверной корреляционной зависимости между количеством CD25⁺CD127^-/CD25⁺CD62L⁺ и FoxP3⁺/CD25⁺FoxP3⁺ нами не обнаружено. Данные результаты согласуются с недавно опубликованными свидетельствами того, что популяции CD127^- и FoxP3⁺ клеток перекрываются лишь частично, а значит, пред­ставляют собой различные группы CD4⁺ Т-лимфоцитов.­

Для выяснения того, каким образом экспрессия маркерных молекул CD127 и CD62L влияет на регу­ляторный потенциал Т-лимфоцитов, была определена экспрессия мРНК референсного маркера T_reg-клеток Foxp3, а также мРНК ключевых иммуносупрессор­ных цитокинов-интерлейкина (ИЛ)-10 и трансформи­рующего фактора роста (ТФР)-?1, методом ОТ-ПЦР в отсортированных популяциях CD4⁺CD25⁺ Т-клеток, различающихся по экспрессии CD127 и CD62L. Вы­явлена тенденция в повышенном уровне экспрессии генов FoxP3⁺, ИЛ-10 и ТФР-?1 в CD4⁺CD25⁺CD127^- и CD4⁺CD25⁺CD62L⁺+ субпопуляциях лимфоцитов по сравнению с CD4⁺CD25⁺CD127⁺ и CD4⁺CD25⁺CD62L^-, что может свидетельствовать о регуляторной активно­сти клеток с данными иммунофенотипами.