УДК: 616.155.32:575.191
Год издания: 2011

Сравнительный анализ количества CD4+CD25+ регуляторных T-лимфоцитов периферической крови по экспрессии маркеров FoxP3, CD127 и CD62L

Вашкевич Е.П.Шман Т.В.
Рубрики: 76.03.5576.29.33
Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии
Тема НИР: «Исследование фенотипических особенностей и супрессорной функции регуляторных Т-лимфоцитов человека»
Сроки выполнения НИР: 15.04.2009 г. — 31.03.2011 г.
Научный руководитель: Е.П. Вашкевич
Источник финансирования: договор с БРФФИ № Б09М-087 от 15.04.2009

На сегодняшний день FoxP3 является наиболее специфичной маркерной молекулой для идентификации регуляторных CD4+CD25+ T-клеток (Treg). Тем не менее, опубликованы свидетельства того, что его экспрессия может обнаруживаться в эффекторных Т-лимфоцитах, не обладающих супрессорной активностью. Напротив, обнаружены лимфоциты, которые способны к иммуно­супрессорному действию, несмотря на отсутствие экс­прессии FoxP3. Были предложены и другие маркеры, которые позволили бы выделить регуляторные Т-клетки среди гетерогенной популяции CD4+CD25+ лимфо­цитов, такие как CD127-, CD62L+ и др. Показано, что CD127 (рецептор к ИЛ-7) экспрессируется преимуще­ственно на активированных CD4+ Т-клетках человека, в то время как CD127low/negCD4+ клетки характеризуют­ся выраженной супрессорной активностью и являются FoxP3-позитивными независимо от уровня экспрессии CD25. CD4+CD25+FoxP3+ Treg-клетки, экспрессирующие CD62L (L-селектин), также обладают более выраженной супрессорной активностью по сравнению с популяци­ей CD62L- Treg-клеток. Однако до сих пор остается не­ясным, какая совокупность фенотипических маркеров наиболее адекватно описывает функциональную попу­ляцию Т-лимфоцитов человека, обладающих иммуносу­прессорными свойствами in vitro и in vivo.

Цель исследования: выявление иммунофенотипа Treg-лимфоцитов, который бы наиболее полно отражал регуляторный потенциал клетки.

Объектом исследования являлись мононуклеарные клетки (МНК) периферической крови, полученные от 32 здоровых доноров. МНК выделяли из перифериче­ской крови на градиенте плотности при 400g 30 минут, дважды отмывали в культуральной среде.

Метод проточной цитофлуориметрии, флуоресцентно-активированная клеточная сортировка, метод полимеразной цепной реакции с обратной транс­крипцией (ОТ-ПЦР).

На первом этапе работы была проанализирована экспрессия FoxP3 на различных по степени экспрессии CD25 субпопуляциях CD4+ Т-лимфоцитов - CD25neg (CD25-негативные), CD25low (низкая/средняя экс­прессия) и CD25hi (высокая экспрессия). Количество активированных/регуляторных CD4+CD25+ Т-клеток у здоровых доноров среди МНК составило 4,8% (ме­диана; диапазон 3,3-13,3%), однако содержание по­тенциальных CD4+ Treg-клеток ниже: 1,3% CD4+CD25hi и 1,3% CD4+FoxP3+ (0,6-2,1 и 0,5-3,2%, соответствен­но; P<0,01). Аналогично, среди CD4+ Т-лимфоцитов доля CD25hi и FoxP3+ соответственно составила 4,3% (1,8-7,8%) и 3,9% (1,4-7,4%), что существенно ниже содержания CD25+ (22,5%; 9,1-43,6%; P<0,01). Также прослеживалась четкая связь между уровнем экспрес­сии CD25 и FoxP3: доля FoxP3+ была значительно и до­стоверно выше среди CD25hi Т-лимфоцитов (40,1%) по сравнению с CD25neg (1,4%; P < 0,01) и CD25low клетка­ми (7,6%; P<0,01). В то же время корреляция между со­держанием CD25hi и FoxP3+ Т-лимфоцитов не выявле­на. Последующее сравнение абсолютного содержания FoxP3+ клеток среди субпопуляций CD4+ лимфоцитов, различающихся по экспрессии CD25, не выявило до­стоверных различий. Значительная часть FoxP3+ Treg-клеток относилась к негативным по CD25. Таким об­разом, определение общего содержания CD4+CD25+ Т-лимфоцитов не отражает истинного количества CD4+ Treg-клеток, что необходимо учитывать при анализе им­мунограммы.

Чтобы выяснить возможность использования CD127- и CD62L+ в качестве маркера FoxP3+ Treg-клеток человека, был проведен корреляционный анализ количества CD4+ с фенотипом CD25+CD127-/CD25+CD62L+ и FoxP3-экспрессирующих клеток (CD25+FoxP3+ либо FoxP3+). Достоверной корреляционной зависимости между количеством CD25+CD127-/CD25+CD62L+ и FoxP3+/CD25+FoxP3+ нами не обнаружено. Данные результаты согласуются с недавно опубликованными свидетельствами того, что популяции CD127- и FoxP3+ клеток перекрываются лишь частично, а значит, пред­ставляют собой различные группы CD4+ Т-лимфоцитов.­

Для выяснения того, каким образом экспрессия маркерных молекул CD127 и CD62L влияет на регу­ляторный потенциал Т-лимфоцитов, была определена экспрессия мРНК референсного маркера Treg-клеток Foxp3, а также мРНК ключевых иммуносупрессор­ных цитокинов-интерлейкина (ИЛ)-10 и трансформи­рующего фактора роста (ТФР)-?1, методом ОТ-ПЦР в отсортированных популяциях CD4+CD25+ Т-клеток, различающихся по экспрессии CD127 и CD62L. Вы­явлена тенденция в повышенном уровне экспрессии генов FoxP3+, ИЛ-10 и ТФР-?1 в CD4+CD25+CD127- и CD4+CD25+CD62L++ субпопуляциях лимфоцитов по сравнению с CD4+CD25+CD127+ и CD4+CD25+CD62L-, что может свидетельствовать о регуляторной активно­сти клеток с данными иммунофенотипами.


Область применения: иммунология, гематология, онкология.
Рекомендации по использованию: результаты исследований могут быть использованы для оценки иммунологического статуса пациентов с различными заболеваниями, при проведении трансплантации гемопоэтической стволовой клетки и др.
Предложения по сотрудничеству: совместные исследования по изучению фенотипических и функциональных особенностей регуляторных Т клеток.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2019 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта