Гнойно-воспалительные заболевания челюстно-лицевой области являются одной из наиболее частых причин обращения пациентов за оказанием специализированной медицинской помощи, что объясняет социальную значимость вопроса и побуждает к разработке новых наиболее информативных методов диагностики и прогнозирования течения гнойно-воспалительных процессов указанной локализации.

Цель: повышение эффективности диагностики распространенности гнойно-воспалительного процесса челюстно-лицевой области.

Для исследования готовят 0,1 М ацетатный буфер с pH 4,4: 2,72 г тригидрат ацетата натрия (СН ₃СООNa?3Н₂ О) растворяют в 100 мл дистиллированной воды. В 37 мл готового раствора добавляют 63 мл 0,2 М уксусной кислоты и доводят с помощью рН-метра (HANNA pH 213) до 4,4.

Раствор субстрата готовят следующим образом: 5,5 мг 2,2′-azinobis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) и 17 мг гидропирита растворяют в 10 мл ацетатного буфера с pH 4,4. Реактивы растворяют по отдельности и перед использованием смешивают.

Для приготовления стоп-раствора 13 мг азида натрия растворяют в 1 мл дистиллированной воды. После добавления в лунку планшеты всех реактивов концентрация азида натрия составит 20 мМ.

Сбор ротовой жидкости (РЖ) для исследования осуществляют в стерильные пробирки, которые маркируют и хранят при температуре -70°С в морозильнике для хранения крови. Перед постановкой реакции размороженную РЖ центрифугируют в течение 10 мин.

Постановка реакции для определения миелопероксидазы (МПО) в ротовой жидкости проводится следующим образом. На каждую пробу в планшете отводится по 6 ячеек (3 — контроль и 3 — опыт). В контрольные ячейки вносят последовательно по 15 мкл РЖ, по 20 мкл азида натрия и по 150 мкл субстрата. В опытные ячейки вносят последовательно по 15 мкл РЖ, по 20 мкл дистиллированной воды и по 150 мкл субстрата. Планшет помещается в термостат при температуре 37°С на 10 мин и в многоканальный спектрофотометр Ф300, где при длине волны 405 нм определяют оптическая плотность.

Результаты реакции анализируют после 10-минутной инкубации при температуре 37°С. Производят количественный учет реакции на спектрофотометре при длине волны 405 нм. Результат для каждой пробы РЖ получают путем расчета разницы между средними показателями трех опытных и трех контрольных измерений. Пересчет активности в unit проводят по калибровочному графику с коэффициентом корреляции 0,96 (p<0,001), построенному по стандартной пероксидазе производства «Sigma».

Формула для пересчета:

Определение вероятности возникновения у пациента флегмоны двух и более клетчаточных пространств производится с помощью компьютерных таблиц Excel по формуле:

Новизна способа заключается в использовании ротовой жидкости в качестве диагностического субстрата при флегмонах челюстно-лицевой области. Разработан метод определения активности миелопероксидазы в ротовой жидкости. Впервые предложена формула для расчета вероятности наличия распространенной флегмоны, основанная на изучении активности миелопероксидазы.